5´-核苷酸酶（5´-NT）的測(cè)定試劑盒的注意點(diǎn)
更新時(shí)間：2023-12-07 點(diǎn)擊次數(shù)：288次5′-核苷酸酶（5′-NT）的測(cè)定試劑盒的注意點(diǎn)
（比色法）
一、測(cè)定意義：
5′-核苷酸酶（5′-NT）廣泛分布于肝臟、膽道系統(tǒng)及各
種器官和組織中。血清中此酶活力增高（2～6）主要見(jiàn)于膽
道系統(tǒng)疾病，如阻塞性黃疸，原發(fā)性及繼發(fā)性肝癌等，且通
常與 ALP 的活力變化相平行。其增高機(jī)理是因高濃度的膽
鹽促使 5′-NT 從細(xì)胞膜上溶解出來(lái)，或膜通透性改變所致，
在骨骼系統(tǒng)的疾患如腫瘤轉(zhuǎn)移、畸形性骨炎、甲狀旁腺機(jī)能
亢進(jìn)、佝僂病等，ALP 活力通常增高，而 5′-NT 仍為正常
或?yàn)榕R界值。所以對(duì) ALP 活力增高患者，測(cè)定此酶有助于
判斷 ALP 活力增高是膽道系統(tǒng)疾病還是骨骼系統(tǒng)疾病引
起。此外，妊娠婦女及兒童期 5′-NT 不增高，但 ALP 均升
高。
二、測(cè)定原理
5′-核苷酸酶（5′-NT）催化腺苷-5′-磷酸水解，生成腺
苷和無(wú)機(jī)磷。測(cè)定產(chǎn)物無(wú)機(jī)磷的含量，代表 5′-NT 活力?？?/span>
以用抑制劑去除其他酶的影響。
三、試劑組成與配制：（100T/48 樣）
試劑一：液體 80mL×1 瓶，4℃冷藏 6 個(gè)月；過(guò)飽和溶液，
會(huì)有針狀結(jié)晶析出，取上清使用。
試劑二：液體 12mL×1 瓶，4℃冷藏 6 個(gè)月。
試劑三：液體 6mL×1 瓶。4℃冷藏 6 個(gè)月。
試劑四：粉劑 2 支，稀釋液 6mL×2 支，4℃冷藏 1 年。臨用
時(shí)將1支粉劑倒入1支稀釋液中，混勻溶解（現(xiàn)
用現(xiàn)配），配好后 4℃可保存二周。
試劑五：液體 60mL×2 瓶，該試劑有腐蝕性,盡量不要碰到
皮膚上，4℃保存 1 年。
試劑六：液體 50mL×1 瓶，該試劑有腐蝕性,盡量不要碰到
皮膚上，室溫或 4℃保存 1 年。
試劑七：粉劑×1瓶，
4℃保存1年；臨用前每瓶加雙蒸水40mL
溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后 4℃避光可保存一周；
試劑八：粉劑×1 瓶，4℃保存 1 年；每瓶加雙蒸水 50mL 溶
解，溶解后 4℃保存 3 個(gè)月；
工作液一的配制：按試劑一：試劑二：試劑四=7:1:1 的比例
配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。根據(jù)您的樣本數(shù)，放寬 1-2 個(gè)
樣本的量，需多少配多少。
工作液二的配制：按試劑一：試劑二：試劑三：試劑四=6:1:1:1
的比例配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。根據(jù)您的樣本數(shù)，放寬
1-2 個(gè)樣本的量，需多少配多少。
定磷劑的配制：按雙蒸水：試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1
比例，先后順序配制,現(xiàn)用現(xiàn)配,好后 4℃避光可保
存 48 小時(shí)。（配試劑所用器皿以及雙蒸水，一定
嚴(yán)格防止磷污染）
試劑九：6mmol/L 磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液 5mL×1 瓶，4℃冷藏 6 個(gè)月；
0.06mmol/L 磷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：取 6mmol/L 磷標(biāo)準(zhǔn)貯備
液 0.05mL 用試劑五稀釋至 5mL 即（100 倍稀釋），
現(xiàn)用現(xiàn)配,配好后可保存 48 小時(shí)。
六、注意點(diǎn)：
1、血漿可能會(huì)出現(xiàn)混濁，如有混濁可 3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘
取上清進(jìn)行檢測(cè)。與金屬螯合的抗凝劑會(huì)干擾反應(yīng)。肝素
抗凝不會(huì)影響。
2、如樣本中酶活性偏低，可將酶促反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)至 60 分鐘，
亦可（計(jì)算公式相應(yīng)改變）。
3、所用器皿嚴(yán)防磷污染，測(cè)試所用試管要求嚴(yán)格，要沒(méi)有一
點(diǎn)磷，若試管放過(guò)磷酸或磷酸鹽緩沖液，一定要洗得非常
干凈，要先用清潔劑加水煮，再用自來(lái)水沖，最后用蒸餾
水沖干凈。最好用一次性塑料試管（本所有售），避免磷污
染是檢測(cè)成敗的關(guān)鍵。
附錄Ⅰ ：組織中 5′-NT 測(cè)定
一、樣本前處理：
準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）:體積（mL）=1:9
的比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件機(jī)械勻漿，
2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定。
[注]：不可用含磷的試劑作為勻漿介質(zhì)（例如 PBS），建
議用生理鹽水。
附錄Ⅱ：血清（漿）5'-NT 測(cè)定
一、樣本前處理：血清（漿）直接取樣進(jìn)行檢測(cè)。
5′-核苷酸酶（5′-NT）的測(cè)定試劑盒的注意點(diǎn)
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