低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測(cè)試盒的樣本處理
更新時(shí)間:2023-12-11 點(diǎn)擊次數(shù):206次低密度脂蛋白膽-固醇(LDL-C)測(cè)試盒的樣本處理
(直接法 分光光度計(jì)法)
一、試劑組成及配制:
二、測(cè)定步驟:
1、樣本處理:
①、血清(漿):直接測(cè)定,如超過(guò)線性范圍用生理鹽水稀
釋后測(cè)定。
②、培養(yǎng)液樣本:吸取培養(yǎng)液,1000 轉(zhuǎn)/分鐘,離心 10
分鐘,取上清測(cè)定。
[注]:一般建議細(xì)胞密度在 100 萬(wàn)個(gè)/mL 以上。
③、組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積
(mL)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的勻漿
介質(zhì),冰水浴條件下機(jī)械勻漿,2500 轉(zhuǎn)/
分,離心 10 分鐘,取上清液待測(cè)。
[注]:1、如組織樣本為非高脂樣本,勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用磷酸
鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進(jìn)行提取。
2、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本,勻漿
介質(zhì)可統(tǒng)一用無(wú)水乙醇進(jìn)行提取。
④、細(xì)胞樣本:
A、細(xì)胞收集:將制備好的細(xì)胞懸液取出,1000 轉(zhuǎn)/
分,離心 10 分鐘,棄上清液,留細(xì)胞沉淀;用
等滲緩沖液(推薦 0.1mol/L 、pH7~7.4 磷酸鹽
緩沖液)清洗 1~2 次,同樣 1000 轉(zhuǎn)/分,離心
10 分鐘,棄上清液,留細(xì)胞沉淀;
B、細(xì)胞破碎:加入 0.2~0.3mL 的勻漿介質(zhì)(推薦
0.1mol/L、pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水)
進(jìn)行勻漿,冰水浴條件下超聲破碎(功率:300W,
3~5 秒/次,間隔 30 秒,重復(fù) 3~5 次)或手動(dòng)勻
漿,制備好的勻漿液不離心直接測(cè)定。也可采
用裂解液裂解(推薦 TritonX-100,1~2%,裂解
30~40 分鐘),裂解好的液體不離心直接測(cè)定。
[注]:一般建議細(xì)胞密度在 100 萬(wàn)個(gè)/mL 以上。破碎好的
液體可顯微鏡觀察細(xì)胞是否破碎
低密度脂蛋白膽-固醇(LDL-C)測(cè)試盒的樣本處理