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天門-冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測(cè)試劑盒(賴氏微板法)的參考范圍

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

轉(zhuǎn)氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之間氨基轉(zhuǎn)換反應(yīng)的一組酶，天門-冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)舊稱谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)主要存在于心肌、骨骼肌、肝臟，以心肌含量最高，肝臟次之，AST 能夠催化天門-冬氨酸和 a-酮戊二酸的氨基轉(zhuǎn)移作用，形成谷-氨酸和草酰乙酸。天門-冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測(cè)試劑盒(賴氏微板法)其檢測(cè)原理是 AST 催化天門-冬氨酸與α-酮戊二酸之間的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)，其反應(yīng)公式如下：

L-天門-冬氨酸+α-酮戊二酸→草酰乙酸+L-谷-氨酸

二硝基苯肼與α-酮酸反應(yīng)生成相應(yīng)的二硝基苯腙，在堿性條件下二硝基苯腙的吸收光譜有差異，通過酶標(biāo)儀檢測(cè)在 500-520nm 處差異最大，以等摩爾濃度計(jì)算出丙酮酸的生成量，進(jìn)而計(jì)算酶的活性。100T 該檢測(cè)試劑盒可檢測(cè) 50 個(gè)樣品(不含標(biāo)準(zhǔn)品)，該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。 

自備材料：

1、蒸餾水或去離子水

2、離心管、水浴鍋或恒溫箱

3、96 孔板、酶標(biāo)儀

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品：

①血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，-20℃

保存 1 個(gè)月有效，用于 AST/GOT 的檢測(cè)。

②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20℃保存 1 個(gè)月

有效，用于 AST/GOT 的檢測(cè)。

③(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)

算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的 AST/GOT 含量。

2、配制 AST 顯色基液(1×)：取 AST 顯色基液(5×)一份加入蒸餾水 4 份稀釋即可使用。

3、制作 AST 標(biāo)準(zhǔn)曲線：取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn) 1 支，準(zhǔn)確加入丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)稀釋液 1ml，充分混勻，即配制成丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(100mmol/L)，4℃保存?zhèn)溆?。臨用前，取適量的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn) (100mmol/L)，按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(100mmol/L)：丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)稀釋液=1：49 的比例混合，即為丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)工作液-丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(2mmol/L)，按下表制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。最好設(shè)定平行檢測(cè)孔，求平均值。

4、AST 酶促反應(yīng)：按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免

產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。

5、AST 測(cè)定：混勻，室溫放置 5min，以蒸餾水調(diào)零，酶標(biāo)儀 505nm 處測(cè)定對(duì)照孔、測(cè)定孔的吸光度(即為 A 對(duì)照、A 測(cè)定)。

計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)活力單位(24、61、114、190)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)

準(zhǔn)曲線，測(cè)定孔的吸光度減去對(duì)照孔的吸光度的差值(即 A 測(cè)定-A 對(duì)照)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得AST活力單位。

參考范圍：成年健康人血清 AST：8~28 卡門單位/ml

注意事項(xiàng)：

1、 二硝基苯肼顯色液溶解以后，如果仍然有結(jié)晶析出，應(yīng)棄用。

2、 AST 顯色基液(5×)有一定腐蝕性，請(qǐng)小心操作。

3、 AST Assay buffer 使用前應(yīng) 37℃提前孵育 5min。

4、 由于賴氏法的特點(diǎn)，在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)每個(gè)點(diǎn)最好做 3 孔的重復(fù)測(cè)定，求出各標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度均值，減去“0"號(hào)管吸光度均值后，對(duì)照賴氏單位繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5、 血清中 AST 活性在室溫可以保存 2 天，4℃保存 1 周，-20℃保存 1 個(gè)月。

6、 成批樣本測(cè)定時(shí)，一般無需每份樣本都做自身血清對(duì)照，以試劑空白代替即可。

7、 對(duì)于超過正常范圍的血清樣本，應(yīng)該進(jìn)行復(fù)測(cè)，復(fù)測(cè)時(shí)每份樣本都應(yīng)做自身血清對(duì)照。

8、 嚴(yán)重黃疸、脂血或溶血的血清，可能會(huì)引起測(cè)定孔的吸光度增高，因此檢測(cè)該類樣本時(shí)應(yīng)做自身血清標(biāo)本對(duì)照。

9、 當(dāng)樣本的酶活力大于 190 卡門單位時(shí)，應(yīng)將樣本進(jìn)行 5~10 倍稀釋后再行測(cè)定。

10、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6 個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。

天門-冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測(cè)試劑盒(賴氏微板法)的參考范圍