大鼠環(huán)磷酸腺苷（cAMP） ELISA試劑盒實驗總結和經(jīng)驗
更新時間：2015-08-27 點擊次數(shù)：1234次 采用酵母致熱大鼠制作大鼠發(fā)熱動物模型,以復方阿司匹林作為陽性對照藥,通過觀察疏解退熱湯對大鼠模型的一般情況、用免疫生化法檢測大鼠下丘腦內(nèi)側(cè)視前區(qū)和正中視前區(qū)PGE2、cAMP的含量進一步探討本方治療小兒外感發(fā)熱的退熱療效及其機理,來證明其組方的合理性,以進一步指導應用。
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方法:本實驗分為兩大部分。均選取健康雄性Wistar大鼠,體重約180-200g。(1)對酵母所致發(fā)熱大鼠體溫的影響:先將大鼠實驗室內(nèi)適應3天,可自由進食水,每天測體溫2次。實驗時同法測體溫3次,每次間隔半小時,剔除體溫波動超過0.3℃的大鼠,取3次體溫的平均值作為基礎體溫。將大鼠隨機分成5組,除正常組外,其余4組均于大鼠背部皮下注射20%酵母混懸液10ml/kg。注射酵母8小時后選擇體溫上升0.8℃以上者,隨機分為模型組、疏解退熱湯高劑量組(簡稱高劑量組)、疏解退熱湯低劑量組(簡稱低劑量組)及復方阿司匹林組(簡稱A.P.C組),每組10只。以上各組用灌胃法給藥1次,給藥容量為10ml/kg,正常組及模型組給予等量蒸餾水。從給藥后1h、2h、3h、4h分別測量體溫1次。(2)對酵母所致發(fā)熱大鼠下丘腦組織中前列腺素E2(PGE2)、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)含量的影響:制備發(fā)熱大鼠模型同前。每組20只大鼠。以上各組用灌胃法給藥1次,給藥容量為10ml/kg,正常組及模型組給予蒸餾水,高劑量組給予疏解退熱湯(2.1g/kg),低劑量組給予疏解退熱湯(1.1g/kg),A.P.C組給予復方阿司匹林(0.1g/kg)。分別于給藥后2h、4h測量體溫,然后快速斷頭取腦(1分鐘內(nèi)取出),取出下丘腦,測定前列腺素E2(PGE2)、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)含量,用ELISA試劑盒嚴格按照試劑盒操作說明書進行,并將各組的體溫值分別與含量進行相關分析。
結果:⑴對酵母致熱大鼠體溫的影響:在注射酵母8h后,與正常組相比,模型組、高劑量組、低劑量組及A.P.C大鼠的體溫均明顯升高(P0.05),而與低劑量、A.P.C組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P$lt;$0.05)。將給藥后2h、4h正常組、模型組、高劑量組的體溫值分別與相應PGE2、cAMP含量進行相關分析,結果表明二者之間均存在明顯正相關(P$lt;$0.01)。結論:疏解退熱湯能顯著抑制酵母混懸液誘導的大鼠發(fā)熱,說明本方有解熱作用,其機理可能是通過某種途徑減少中樞發(fā)熱介質(zhì)的含量來發(fā)揮解熱作用的。
