信帆生物帶您走進蛋白純化實驗
更新時間：2016-12-19 點擊次數(shù)：1005次固定化金屬親和層析（IMAC）是蛋白純化的常用方法，特別適用于純化多組氨酸（His）標簽融合蛋白。金屬離子通過螯合劑（配體）固定到基質(zhì)上，與多組氨酸標簽相互作用，有效的螯合樣品中的融合蛋白。氮川三乙酸（NTA）和亞氨基二乙酸（IDA）是商業(yè)化樹脂中經(jīng)常使用的螯合配基。怎樣選擇合適的配基和金屬離子，應用于蛋白純化實驗呢？
首先，我們比較一下NTA和IDA。NTA是4價結構，IDA是3價結構，NTA比IDA多一個羧甲基。結構上的不同，使得NTA比IDA更穩(wěn)定，能得到更高純度的目標蛋白。IDA更小，使得它與基質(zhì)更緊密的結合，提高了載量，但同時也導致了更多的非目標蛋白的結合，但IDA相對便宜。
一些還原劑會影響IDA、NTA的性能。比如DTT會使金屬離子從IMAC 樹脂上剝落，常常會使樹脂的顏色變?yōu)樽厣?；EDTA對配基的影響更大。但實驗顯示，NTA耐受各類化學試劑的能力明顯優(yōu)于IDA。
總結起來，選用IMAC純化蛋白前，得先問這幾個問題：
1.蛋白純度、蛋白載量，哪個是你的目標？
2.你的樣本中是否包含一些還原試劑如DTT或EDTA？
3.你的預算是？
如果你只是想得到高的蛋白產(chǎn)量，對純度的要求稍微低點，IDA結合的樹脂可能是你正確的選擇。如果想zui大限度的減少非特異性結合，可以使用Zn2+ 或Co2+結合樹脂。從各類數(shù)據(jù)來看，NTA結合樹脂都表現(xiàn)出的*性。而Ni-NTA樹脂則相當于His標簽蛋白純化的行業(yè)標準！
不同的樣本或許純化的條件不盡相同，但以上zui基本的原則不同樣本都是適用的。
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