普魯士藍染色液（核固紅法）使用說明書
更新時間：2019-05-16 點擊次數(shù)：2367次 含鐵血黃素(Hemosiderin)是一種血紅蛋白源性色素，為金黃色或棕黃色顆粒，因其含鐵，且為金黃色，故稱為含鐵血黃素。當(dāng)紅細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬后，在溶酶體酶的作用下，血紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質(zhì)和含鐵的含鐵血黃素。Perls普魯士藍反應(yīng)(Prussian blue reaction)又稱為含鐵血黃素染色，即經(jīng)過亞鐵氰化甲和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍色，常見于吞噬細(xì)胞或間質(zhì)內(nèi)，其染色原理在于亞鐵氰化甲溶液使三價鐵離子從蛋白質(zhì)中被稀鹽酸分離出來，三價鐵與亞鐵氰化甲反應(yīng)，生成一種不溶解的藍色化合物即三價鐵的亞鐵青化物。
普魯士藍染色用于顯示局部組織內(nèi)的各種出血性病變，常見于吞噬細(xì)胞內(nèi)，可以很好地區(qū)分含鐵血黃素與其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以保存、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣，可以進行復(fù)染。該染色液的復(fù)染液采用核固紅，是經(jīng)典、常用的復(fù)染液。
操作步驟(僅供參考)：
(一)石蠟切片染色：
1、組織固定于10%中性福爾馬林，常規(guī)脫水包埋。
2、切片厚度4μm，常規(guī)脫蠟至水。
3、蒸餾水水洗 1min。
4、切片入Perls stain(見注意事項2)，浸染15～30min。
5、蒸餾水充分沖洗2～5min。
6、入核固紅染色液，淡染細(xì)胞核5～10min。
7、自來水沖洗1～5s。
8、常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固
(二)冰凍切片染色：
1、無需脫蠟，直接迅速用蒸餾水沖洗2～3min。
2、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，時間可以相應(yīng)縮短。
(三)細(xì)胞染色：
1、4%多聚甲醛固定10～20min。
2、自來水沖洗2次，每次2min。
3、蒸餾水沖洗2次，每次2min。
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，時間可以相應(yīng)縮短
注意事項：
1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。組織固定常采用10%中性福爾馬林，經(jīng)普通福爾馬林固定后，組織會有損傷。避免使用酸性固定劑，鉻酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。
2、整個操作過程中容器要干凈，避免用金屬鐵制品，洗切片和容器時以蒸餾水為宜，因普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。Perls stain 染色時，應(yīng)根據(jù)樣本情況調(diào)整著色時間。
3、所有切片都應(yīng)使用同一個陽性對照切片，選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個很好的對照，包含相當(dāng)數(shù)量的鐵陽性巨噬細(xì)胞(心衰細(xì)胞)。
4、冰凍切片和細(xì)胞染色，根據(jù)具體情況摸索實驗條件
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