上海信帆報道：冰凍切片
更新時間：2015-05-06 點擊次數(shù)：1134次上海信帆生物代理銷售 冰凍切片，現(xiàn)貨供應，歡迎
簡介編輯
冰凍切片（frozen section）是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應用于手術中的快速病理診斷。冰凍切片的種類較多，有低溫恒冷箱冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。這些方法，隨著時代的變遷，科技的發(fā)展，許多年前被認為是非常重要的技術，現(xiàn)在也逐步被淘汰了。當然有些技術，如低溫恒冷箱冰凍切片法，正在受到青睞。
2冰凍切片的應用編輯
（1）在手術進行中，突然發(fā)現(xiàn)病人的病變與原診斷，原定手術方案不相符合，或者懷疑時，需要病理確定。
（2）了解淋巴結內是否有轉移的腫瘤細胞，或者轉移的程度，以利于確定是否需要*掃除淋巴結或者其它的治療措施。
（3）對于已確定為惡性腫瘤的患者，則需要了解其手術范圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤組織。
（4）在做剖腹探查時所發(fā)現(xiàn)的腫塊或者異樣的組織。
（5）顯示組織中的脂肪和脂類物質，這常見于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研組織等。
（6）某些酶的顯示如ATP酶，琥珀酸脫氫酶等。
（7）神經病理學技術中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Hortega氏法和Holzer氏法等。
（8）對某些物質所進行的免疫熒光的研究。
3術中為何做冰凍切片編輯
病理檢查首先需要將切下的病變組織器官作一系列技術處理，包括固定、取材、脫水、浸蠟、包埋、切片和染色等，一般需花費24小時方可完成全部制片過程，然后由病理醫(yī)生用顯微鏡觀察，并做出診斷。這種檢查方法稱為常規(guī)石蠟切片，是病理檢查中zui常用的方法。但是，這種方法從外科醫(yī)生將病變組織切下，到做出病理診斷，前后通常需要3天的時間。有時外科醫(yī)生希望在手術過程中馬上了解病變的性質，以便及時確定手術范圍，并做出相應的處理，就要求病理醫(yī)生在手術過程中做出病理診斷，此時就必須快速切片診斷，快速冰凍切片是目前應用的zui廣泛的方法。
快速冰凍切片是用于手術中病理診斷的一種方法，病理醫(yī)生在收到手術標本后約l5分鐘之內做出診斷，馬上告訴手術醫(yī)生，以便迅速作出下一步治療決策。病理診斷的正確與否直接關系到手術臺上處理患者的下一個步驟，如乳腺腫塊切除后的冰凍報告是良性的纖維腺瘤，則可宣告手術結束；如冰凍報告是乳腺癌，就需要進一步擴大手術范圍，切除整個乳房及腋窩淋巴結；肢體的惡性腫瘤如骨肉瘤，通常需截肢。冰凍切片病理診斷對手術治療有重大幫助和指導意義，診斷要力求正確、迅速和可靠。
然而，快速冰凍切片要在如此之短的時間內做出診斷，難度相當高，取材有局限性，制作切片的質量也不如常規(guī)石蠟切片高。因此，冰凍切片的確診率比常規(guī)切片低，有一定的延遲診斷率和誤診率。目前，冰凍切片診斷尚不能廣泛應用，即使選擇性應用，事后仍需用常規(guī)石蠟切片對照和存檔。
快速冰凍切片主要用于下列幾種情況：
①確定病變是否為腫瘤；
②判斷腫瘤的良惡性；
③了解腫瘤有無播散到鄰近淋巴結或臟器；
④確定手術切緣有無腫瘤浸潤，以了解手術范圍是否足夠大；
⑤幫助識別手術中某些意外和確定可疑微小組織（如甲狀旁腺、輸卵管或輸精管等）；
⑥取新鮮組織供激素受體測定、腫瘤藥敏試驗、電鏡檢查和分子生物學檢查等特殊需要。 [1]
4冰凍切片的制作方法編輯
低溫恒冷箱冷凍切片制作法
以Shandon As 620 E型恒溫箱冷凍切片機為例，該機的箱面上有電子控制板，裝有即時冷凍鍵和除霜鍵，啟動即時冷凍鍵，機器馬上進行工作狀態(tài)，并可持續(xù)10mins。啟動即時除霜鍵，可將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除掉，并可持續(xù)15mins。有照明鍵一個，啟動該鍵可照明工作間，有利工作及觀察組織的冰凍狀況。配有消毒鍵一個，當進行一周的工作或者一天的工作后，啟動該鍵，可對工作間進行消毒。當每天工作完畢時，可啟動密鎖鍵，鎖住工作間。除此之外，箱面的左邊有四個按鍵，兩個為快速自動進退鍵，兩個為微小進退鍵，還有一個手動旋鈕，調節(jié)修組織塊時的進退。
冷凍箱內左邊的冷凍臺，溫度可達-60℃左右，冷凍箱的中間為一臺切片機，工作間的溫度在0-30℃間可任意調節(jié)，并在箱面上的熒屏顯示出來。
操作方法及步驟
①取材，未能固定的組織取材，不能太大太厚，厚者冰凍費時，大者難以切完整，為24×24×2mm。
②取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺上，冰凍。小組織的應先取一支承器，滴上包埋劑讓其冷凍，形成一個小臺后，再放上細小組織，滴上包埋劑。
③將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機持承器上，啟動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平。
④調好欲切的厚度，根據不同的組織而定，原則上是細胞密集的薄切，纖維多細胞稀的可稍為厚切，一般在5～10um間。
⑤調好防卷板。制作冰凍切片，關鍵在于防卷板的調節(jié)上，這就要求操作者要細心，準確地將其調較好，調校至適當?shù)奈恢?。切片時，切出的切片能在*時間順利地通過刀防卷板間的通道，平整地躺在持刀器的鐵板上。這時便可掀起防卷板，取一載玻片，將其附貼上即可。
⑥應視不同的組織選擇不同的冷凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根據不同的組織而定，不能一概而論。如：切未經固定的腦組織，肝組織和淋巴結時，冷凍箱中的溫度不能調太低，在-10- -15℃左右，切、脾、腎、肌肉等組織時，可調在-15～20℃左右，切帶脂肪的組織時，應調至-25℃左右，切含大量的脂肪時，應調至-30℃。
冰凍切片時的注意事項
①防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應保持干凈，需經常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因為這個地方是切片通過和附貼的地方，如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上，將會破壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。
②多例多塊組織同時需做冰凍切片時，可各自放于不同的支承器上，于冷凍臺上凍起來，然后依據不同的編號，依序切片，這樣做既不費時也不會亂。
③放置組織冰凍前，應視組織的形狀及勢來放置，所謂“砍柴看柴勢"，切片也是如此，如果胡亂放置，就不能收到很好的效果。
④組織塊不須經各種固定液固定，尤其是含水的固定液，在未達到固定前，更不能使用?？焖俦鶅銮衅?，不須要預先固定，一是為了爭取時間，二是固定了的組織，反而增加了切片的難度。如果使用未*固定的組織做冰凍切片，就會出現(xiàn)冰晶。這是因為含水的固定液在組織未經固定前，其中的水份也可滲入到組織中去，當冰凍發(fā)生時，這些水份就存留于組織中，形成了冰晶。
⑤當切片時，如果發(fā)現(xiàn)冰凍過度時，可將冰凍的組織連同支承器取出來，在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來軟化組織，再行切片。另者，調高冰凍點。
⑥用于附貼切片的載玻片，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因為當附貼切片時，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時，由于兩種物質間溫度的差別，當它們碰撞在一起時，分子彼此間發(fā)生轉移而產生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片，由于溫度相同，沒有發(fā)生上述的現(xiàn)象。
冰凍切片的快速染色法
冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分鐘后即可染色。以往，為了防止切片脫落，當切片附貼于載玻片后，即用電吹風吹干后再固定。根據實驗對比認為這種做法欠妥未經固定的切片，強熱作用后，蛋白發(fā)生變性，核內含有的物質由于熱的作用融合在一起，染色后鏡下分辨不出核內的各種物質。冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，這樣可以使切片中細胞內各種物質都在沒有任何變化的情況下被固定起來，核染色質清晰，核仁明顯，其他物質都完好保存。
方法：
① 切片固定30秒－1分鐘。
② 水洗。
③ 染蘇木素3－5分鐘。
④ 分化。
⑤ 于堿水中返藍20秒。
⑥ 伊紅染色10－20秒。
⑦ 脫水，透明，中性樹膠封固。
冰凍組織1－2分鐘，切片1分鐘，固定1分鐘，染色共五分鐘?？偣苍?0分鐘內完成快速制片過程，結果與石蠟切片不相上下。
冰凍切片的方法還有很多種，如甲醇循環(huán)的半導體冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，半導體冰凍切片法和氯乙烷冰凍切片法等，這些方法在目前來說已很少使用，因此在這里不作闡述。
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