祝賀大連醫(yī)科大學(xué)付老師文章發(fā)表,并且榮獲中國(guó)碩士學(xué)位論文
更新時(shí)間:2015-09-22 點(diǎn)擊次數(shù):1173次 熱烈祝賀大連醫(yī)科大學(xué)付老師文章見(jiàn)刊,并且榮獲中國(guó)碩士學(xué)位論文,文章名稱(chēng):《恥垢分枝桿菌動(dòng)物模型的構(gòu)建及其與宿主免疫系統(tǒng)的相互作用》,希望付老師以后能有更加的文章見(jiàn)刊。
文章中所用到的試劑盒是付老師在我們公司購(gòu)買(mǎi)的(上海信帆生物科技有限公司,Shanghai Xinfan Bio techology Co.,Ltd)
小鼠白介素10(IL-10)elisa試劑盒
小鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒
小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)Elisa試劑盒
小鼠干擾素-γ(IFN-γ)ELISA試劑盒
上海信帆生物專(zhuān)注于科研ELISA試劑盒,致力于為更多的科研客戶(hù)用戶(hù)提供、的ELISA試劑盒。在過(guò)去的2年多的時(shí)間里,我們收到很多客戶(hù)反饋過(guò)來(lái)的好評(píng),其中不乏很多已經(jīng)發(fā)表了文章的。對(duì)客戶(hù)來(lái)說(shuō),上海信帆生物不僅銷(xiāo)售產(chǎn)品,更是為大家提供服務(wù),只要您嘗試,上海信帆絕不會(huì)讓您失望。我們有專(zhuān)業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),全程提供技術(shù)指導(dǎo),提供售后服務(wù),以及免費(fèi)代測(cè)。在未來(lái),我們會(huì)一如既往的服務(wù)好每一位顧客朋友。
文章主要講述了:結(jié)核病(Tuberclosis)是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種嚴(yán)重的呼吸道傳染病。結(jié)核病引起的后果對(duì)社會(huì)來(lái)說(shuō)是巨大的?,F(xiàn)在*三分之一的人口(約20億人)已經(jīng)感染了結(jié)核分枝桿菌,結(jié)核病占疾病的2.5%。盡管比起其他感染性疾病結(jié)核病的發(fā)病率有一個(gè)穩(wěn)固的下降,但是除非有重大的研究結(jié)果出現(xiàn),結(jié)核病持續(xù)較高死亡率的情況將持續(xù)到2020年。艾滋病和其合并形成了一個(gè)致死性的疾病組合,互相能加速發(fā)病的進(jìn)程。這樣的情況說(shuō)明,結(jié)核病的發(fā)病與否與宿主的免疫系統(tǒng)有著非常密切的,因此結(jié)核病也成為世界關(guān)心的健康問(wèn)題。[1,2,3] 分枝桿菌屬包括大約100多種菌,其中包括能引起結(jié)核病的致病性分枝桿菌,如結(jié)核分枝桿菌;同樣還包括非致病性的分枝桿菌,如恥垢分枝桿菌。恥垢分枝桿菌是一種與結(jié)核分枝桿菌具有同源性、快速生長(zhǎng)、少量接種對(duì)豚鼠、大鼠、小鼠無(wú)致病性的分枝桿菌[4,5]。其細(xì)胞壁表面的有效抗原成分,如脂阿拉伯甘露糖(LAM)、脂蛋白(LP)及全細(xì)胞溶解物(Whole Cell Lysate,WCL),是與宿主免疫系統(tǒng)互相作用的分子[8,9],這些分子是安全、有效的免疫調(diào)節(jié)劑,能有效地促進(jìn)免疫系統(tǒng)的Th1應(yīng)答[9]。 在闡明結(jié)核病發(fā)病機(jī)制、研發(fā)疫苗等實(shí)驗(yàn)研究中,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是zui有效和*的方法[13,17]。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了構(gòu)建恥垢分枝桿菌小鼠模型的方法,不但對(duì)小鼠的外部傷害減少的zui低程度,同時(shí)也更真實(shí)地模擬了人類(lèi)感染結(jié)核分枝桿菌的方式,以此來(lái)探討高濃度(5×107CFU/day)恥垢分枝桿菌構(gòu)建小鼠模型的可行性。 本實(shí)驗(yàn)的目的: (1)本實(shí)驗(yàn)利用高濃度(5×107CFU/day)的非致病性恥垢分枝桿菌構(gòu)建小鼠模型,以微生物氣溶膠氣霧攻擊方式使小鼠肺部產(chǎn)生類(lèi)結(jié)核狀病變,來(lái)探討利用此種方法、此種條件下,建模的可行性; (2)探討高濃度(5×107CFU/day)的非致病性恥垢分枝桿菌在持續(xù)感染的情況下使小鼠肺部產(chǎn)生病理?yè)p傷的原因; (3)探討恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁表面成分脂阿拉伯甘露糖(LAM)對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的刺激和調(diào)節(jié)作用; (4)探討恥垢分枝桿菌全細(xì)胞溶解物(WCL)對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的刺激和調(diào)節(jié)作用。 本實(shí)驗(yàn)的主要方法: (1)選擇近交系動(dòng)物中對(duì)分枝桿菌zui敏感的的C57BL小鼠,周齡為4-8周的雄性小鼠; (2)利用加入0.05%的Tween80LB液體培養(yǎng)基培養(yǎng)野生型恥垢分枝桿菌M.Smegmatis mc2155菌株; (3)利用M.Smegmatis mc2155的生長(zhǎng)曲線與OD589測(cè)定菌液的濃度; (4)提取野生型恥垢分枝桿菌M.Smegmatis mc2155細(xì)胞壁表面物質(zhì)脂阿拉伯甘露糖(LAM); (5) M.smegmatis mc2155WCL(Whole Cell Lysate,全細(xì)胞溶解物)的制備:菌體細(xì)胞與細(xì)胞裂解液37℃孵育10min,菌液進(jìn)行超聲破碎,功率200W,破碎30s,間歇30s;破碎20-30個(gè)循環(huán); (6)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物C57BL小鼠隨機(jī)分成5組:空白組,S組,LS組, WS1組,WS2組。各組動(dòng)物分籠飼養(yǎng),自由飲食飲水,飼養(yǎng)條件保持恒溫恒濕,并定期通風(fēng)消毒。 (7)小鼠的處理:各組小鼠按如下方式制備感染物,利用微生物氣溶膠發(fā)生器制備感染物的氣溶膠懸液,以氣霧攻擊方式感染小鼠。S組:5×107CFU野生型M.smegmatis MC2155;LS組:30μg/day LAM,預(yù)處理兩天,第三天開(kāi)始5×107CFU野生型M.smegmatis MC2155處理;WS1組:全細(xì)胞溶解物:野生型M.smegmatis MC2155=1:1混合物;WS2組:全細(xì)胞溶解物:野生型M.smegmatis MC2155=9:1混合物。 (8)分別在第7、14、21、28天,各組隨機(jī)選擇3只小鼠:眼球取小鼠外周血,分離血清;檢測(cè)血清中IFN-γ、IL-6、IL-10、GM-CSF四中細(xì)胞因子的水平;取肺部組織,一部分做病理切片觀察病理變化,另一部分用來(lái)檢測(cè)肺部組織中活菌的數(shù)量。 本實(shí)驗(yàn)的結(jié)論: (1)用氣霧攻擊方式,以5×107CFU/day的濃度構(gòu)建恥垢分枝桿菌C57BL小鼠模型是可行的; (2)高濃度(5×107CFU/day)的恥垢分枝桿菌持續(xù)感染而使小鼠產(chǎn)生肺部病理?yè)p傷的原因是Th1/Th2反應(yīng)失衡; (3)恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁成分LAM能激活Th1反應(yīng)具有免疫調(diào)節(jié)作用; (4) WCL與少量活菌混合后的免疫調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于單獨(dú)使用LAM,為研發(fā)新的疫苗奠定基礎(chǔ)。