elisa實驗中移液器的操作技巧
更新時間：2017-02-27 點擊次數(shù)：1857次
在elisa實驗中，移液結(jié)果會很容易受到使用技法的影響。為了獲得結(jié)果，需要采用良好的移液技法。本系列教育電子快訊將向您介紹關(guān)于獲得性能的技巧和竅門。
技巧 1：一致性
在按壓與釋放定位銷時，需要保持一致的節(jié)奏、速度和技法。
吸液速度過快會導(dǎo)致套柄與活塞噴濺、產(chǎn)生氣霧以及受到污染，甚至導(dǎo)致樣品量損耗。
一致性可使準確度提高達 5%。
技巧 2：正確填充吸頭
當某一吸頭的建議（標稱）范圍為zui大吸頭容量（標稱容量）的 10% 至 100% 時，可在 35% 至 100% 這一較小以及優(yōu)化的范圍內(nèi)實現(xiàn)zui高度。
在如此小的范圍內(nèi)移液會減少對操作人員技法的要求，并可將結(jié)果準確度提高約 1%。
當達到標稱容量的 50% 時可提供結(jié)果。
技巧 3：吸液時保持垂直入水角
使入水角盡可能地接近垂直位置 – 否則垂直液柱較小，這樣將會吸入過多樣品。
（分液時，吸頭應(yīng)當與容器壁保持較小角度，從而確保良好的排液效果。關(guān)于分液的更多技巧將在下一期電子快訊中提供）
使用垂直位置（尤其是使用微量移液器時），可使準確度提高達 2%。
技巧 4：一致性千分尺設(shè)置
始終從同一方向設(shè)置您的千分尺。
從高至低進行：
在將容量設(shè)置從高容量減少降至低容量時，只需將表盤下調(diào)至所需容量設(shè)置。
提高容量設(shè)置時，轉(zhuǎn)動選擇輪使其略微超過所需容量，然后緩慢回調(diào)至正確設(shè)置。這可避免機械回沖。
正確設(shè)置容量可使準確度提高達 0.5%。
技巧 5：吸頭入水深度
正確的吸頭入水深度對于微量移液器尤為重要。如果吸頭入水過深，則隨著壓力的加大，吸液量將會增多。保留在吸頭表面的液體會影響結(jié)果。如果吸頭未入水過深，則會造成空氣進入，從而產(chǎn)生氣泡以及導(dǎo)致容量不準確。正確的入水深度可使準確度提高達 5%。
| 移液器容量 | 入水深度 |
| 2 與 10ul | 1mm |
| 20 與 100ul | 2-3mm |
| 200 與 1000ul | 3-6mm |
| 5000ul 與 10ML | 6-10mm |
技巧 6：分液技法
對于大多數(shù)應(yīng)用而言，建議在分液時將吸頭的末端貼靠容器壁。這可減少或者消除分液后殘留在吸頭上的樣品。沿側(cè)壁向上滑動吸頭末端將移液器拆下，從而去除吸頭孔處的任何殘留液滴。此技法可使結(jié)果準確度提高達 1%。
另一種技法是直接分液到液體表面。使用諸如 RAININ FinePoint 吸頭之類的薄壁吸頭十分重要，這是因為這些吸頭允許充分排液。
如果直接分液至液體中，則建議進行反向模式移液，從而防止分液后吸液。
技巧 7：預(yù)清洗
移液前至少預(yù)清洗兩遍，從而補償位于吸頭內(nèi)部的液體。這還有助于中和毛細管效果以及使移液器內(nèi)部的空氣溫度等于樣品溫度。
使用正在分液的相同液體進行預(yù)清洗。
使用吸頭吸液，然后將其重新分液至儲罐或者廢液箱
預(yù)清洗可為所有等分溶液提供相同的接觸表面
當與水液一同使用時，兩次預(yù)先沖洗可使準確度提高達 0.2%
技巧 8：預(yù)清洗異常處理
盡管預(yù)清洗在大多數(shù)情況下可提高準確性，但是當對非常溫和或者冰冷的溶液進行移液時，它會對結(jié)果產(chǎn)生不利影響。
不建議進行預(yù)清洗的例外情況為：
- 對非常冰冷的溶液（如：冰?。┻M行移液
- 對 37°C 或以上的溫和溶液進行移液
對溫和或者冰冷溶液進行預(yù)清洗有可能造成高達 5% 的錯誤率。
技巧 9：恒定室溫
在恒定室溫條件下移液。移液的理想室溫為 +- 21.5°C，此溫度同樣適用于校準。防止溫度大幅度或者突然變化，這是因為移液器中的空氣無法足夠快速地適應(yīng)，以及樣品量可能會受到影響。在恒溫條件下移液可使準確度提高達 5%。
技巧 10：始終垂直存放移液器
不要將移液器平放在抽屜內(nèi)或者工作臺上。這有可能損壞套柄末端，從而造成泄漏。此外，殘留液體還會流入套柄中，從而污染移液器。正確儲存移液器可防止不可估量的錯誤以及保護儀器。
技巧 11：吸頭入水時間
在將樣品吸入吸頭時，在樣品中的入水時間是良好移液技法中的關(guān)鍵因素。在平穩(wěn)松開定位銷按鈕之后，必須進行短暫暫停，然后再從樣品中取出，以確保將全量樣品吸入吸頭中。如果量以及對于粘性物質(zhì)而言，必須在等候較長時間后再取出，因為移液器中的氣室需要一秒鐘的時間才能實現(xiàn)均衡。
技巧 12：吸液速率
移液器的吸液速率不盡相同，因此會對結(jié)果的精度與準確度產(chǎn)生影響。用戶應(yīng)使用以一種平穩(wěn)并且受控的方式釋放移液器定位銷按鈕。釋放過快的定位銷可能出現(xiàn)的zui常見后果是：氣霧會進入移液器套柄中，從而損壞移液器的內(nèi)部部件。當出現(xiàn)向上噴濺液體的情況時，這種現(xiàn)象更為明顯。如果液體具有腐蝕性，則有可能損壞移液器的套柄并且會造成樣品交叉污染。
技巧 13：反向移液模式
對于科研人員而言，使用移液器對粘性與密致液體進行吸液與分液一直是一道難題。對策是使用反向移液模式。進行樣品吸液時，將定位銷下按至“排液”。將所選液量和多余液體吸入吸液器吸頭中。然后在分液時，將定位銷只按至零位。通過此方法，在分液時液體會保持在吸頭內(nèi)。對于生物、粘性或起泡液體而言，反向移液可改進結(jié)果。
