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骨保護(hù)素的研究

OPG（骨保護(hù)素），又叫破骨細(xì)胞抑制因子（osteoclastogenesis inhibitory factor），是一種生長(zhǎng)因子受體，屬于腫瘤壞死因子（TNF）受體家族。

OPG是RANKL（破骨細(xì)胞分化因子）的誘導(dǎo)受體，通過(guò)與RANKL的結(jié)合減少破骨細(xì)胞的產(chǎn)生。

OPG(曲面體層攝影法)，即 orthopantomography。1954年P(guān)eatero醫(yī)生研制了三軸旋轉(zhuǎn)曲面體層機(jī)，使射線可垂直于顱骨表面入射，日本學(xué)者Eiko Sairenji提出將這種曲面體層攝影法稱(chēng)為orthopantomography，簡(jiǎn)寫(xiě)OPG。

OPG/RANKL/RANK系統(tǒng)是調(diào)控骨代謝的重要通路之一。成骨細(xì)胞表達(dá)的RANKL與破骨細(xì)胞表面RANK結(jié)合，可促進(jìn)破骨細(xì)胞分化成熟。

OPG具有抗內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞成熟等作用。

隨著關(guān)節(jié)破壞程度的加重，RANKL mRNA組織中的表達(dá)量增加，OPG的表達(dá)量也增加，RANKL/OPG的比值增加程度比OPG增加明顯，在模型建立4周時(shí)達(dá)到9∶1，表明RANKL與OPG的表達(dá)比例與破骨細(xì)胞的功能、活性、分化與成熟呈正相關(guān)。

局部微環(huán)境中RANKL與OPG的相對(duì)比值決定骨組織中破骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞功能傾向，決定局部骨組織是吸收、破壞還是增生，而且決定骨的破壞程度。

觀察骨保護(hù)素(OPG) 作為始動(dòng)因素對(duì)人內(nèi)皮細(xì)胞的數(shù)量變化及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)和一氧化氮(NO)產(chǎn)生的影響。

骨保護(hù)素的研究

方法:常規(guī)培養(yǎng)永生化的人內(nèi)皮細(xì)胞,以不同濃度(0、0.5、1.0、2.0、4.0、 6.0、8.0、10.0及100.0 ng/ml,共9組)的OPG作用細(xì)胞48 h后,用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(cell count kit,CCK-8)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的數(shù)量及NO檢測(cè)試劑盒檢測(cè)NO的產(chǎn)量。

用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)eNOS蛋白表達(dá)的水平,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)eNOS基 因的定量表達(dá)。結(jié)果:與對(duì)照組的細(xì)胞數(shù)(0.759±0.067)相比,8.0 ng/ml OPG組的細(xì)胞數(shù)為(1.091±0.200),P0.05,10.0 ng/ml OPG組的細(xì)胞數(shù)為(1.103±0.152)及100.0ng/m1 OPG組的細(xì)胞數(shù)為(1.231±-0.192),均P0.01。8.0 ng/ml OPG組NO生成量為(102.224±-0.612)μmol/L(P0.05),10.0ng/ml OPG組NO生成量為(117.183±-0.552)μnol/L和100.0ng/ml OPG組NO生成量為(128.216±0.492)μmol/L(均P0.01)。

同時(shí)eNOS蛋白及eNOS mRNA的表達(dá)量在6.0 ng/ml、8.0 ng/ml、10.0 ng/ml及100.0 ng/ml OPG組均顯著地呈濃度依賴(lài)性增加(均P0.01)。

結(jié)論:OPG具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖效應(yīng),可能在抗動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中有一定意義,且與濃度梯度呈明顯的正相關(guān)。

骨保護(hù)素(OPG)屬于腫瘤壞死因子受體家族,具有抑制破骨細(xì)胞分化,抑制其骨吸收活性及其凋亡的作用. 血管鈣化是活躍的血管結(jié)構(gòu)的骨化,晚近研究表明骨保護(hù)素參與了血管壁的鈣化.

OPG基因剔除小鼠表現(xiàn)為嚴(yán)重的骨質(zhì)疏松,而在華法令和Vit D誘導(dǎo)的血管鈣化小鼠模型中,給予OPG可顯著抑制血管鈣化,證實(shí)了OPG的血管保護(hù)作用.

血漿OPG水平可能反映血管鈣化的范圍和程度,反映血管疾病的 發(fā)展?fàn)顟B(tài),可望成為血管鈣化的標(biāo)志之一.

骨保護(hù)素的研究

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血清：胎牛血清,人血清,動(dòng)物血清，NQBB,Hyclone，Gbico原裝血清 。
生物試劑：Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品：進(jìn)口對(duì)照品,進(jìn)口對(duì)照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品.
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