反轉(zhuǎn)錄試劑盒的組成和使用方法
更新時(shí)間：2019-05-13 點(diǎn)擊次數(shù)：2107次反轉(zhuǎn)錄試劑盒的組成和使用方法，上海信帆生物供應(yīng)反轉(zhuǎn)錄試劑盒，該產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，*！如果有需要，可以找上海信帆生物科技有限公司。
通用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(M-MLV)
規(guī)格：50T/100T
保存：-20℃保存，避免反復(fù)凍融，復(fù)檢期為 1 年。
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑盒組成 50 次 100 次
M-MLV(200U/μL) 50μL 50μL×2
5×M-MLV Buffer 200μL 400μL
Oligo(dT)16(10uM) 100μL 200μL
RNasin(40U/μL) 25μL 50μL
dNTPs(10mM) 50μL 100μL
RNase-free ddH2O 1mL 1mL×2
說明書 1 份 1 份
產(chǎn)品簡介：
本試劑盒適用于各種 RNA 制品的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。它采用 M-MLV 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，能夠獲得較
長的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物用于后續(xù)的 PCR 擴(kuò)增和分子克隆實(shí)驗(yàn)。
本試劑盒中配置的酶為進(jìn)口的酶。RT 酶采用進(jìn)口的 M-MLV，所以 cDNA 更長，基因的信息保
留得更完整！反轉(zhuǎn)錄過程中特異的 RNase 抑制劑可有效降低由于外源 RNase 污染而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗的
風(fēng)險(xiǎn)。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于 cDNA 克隆及目的基因檢測等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
一、反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
1、在冰浴的無 RNase 的離心管中加入如下反應(yīng)成分：
1-5μg 總 RNA 或 50-500ng mRNA
2μL Oligo(dT)16或 2 pmole 基因特異性引物
補(bǔ) RNase-free ddH2O 至 14.5μL
2、70℃保溫 5min 后迅速在冰上冷卻 2min，簡短離心收集反應(yīng)液后加入以下各組分：
4μL 5×M-MLV Buffer
1μL dNTPs
0.5μL RNasin
1μL M-MLV
3、42℃溫浴 60min，如果是用隨機(jī)引物，請先將離心管置 25℃溫浴 10min，再 42℃溫浴 60min。
4、95℃加熱 5min 終止反應(yīng)，置冰上進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-20℃保存。
5、若用于后續(xù) PCR 擴(kuò)增,用 RNase-free ddH2O 將反應(yīng)體系稀釋到 50μL，取 2-5μL 作為 PCR 反應(yīng)模板。
注意事項(xiàng)：
1、用于 cDNA 合成反應(yīng)的相關(guān)試劑和耗材盡可能用 DEPC 進(jìn)行處理，并在高壓滅菌后使用。有些
試劑不能高壓滅菌時(shí)，首先用經(jīng)過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進(jìn)行過濾除菌處理。
2、試劑盒的各組分應(yīng)在-20℃保存，避免反復(fù)凍融，有效期 12 個(gè)月。
3、RNA 樣品要避免反復(fù)多次凍融，應(yīng)使 RNA 在冰浴中處于融化狀態(tài)。
反轉(zhuǎn)錄試劑盒的組成和使用方法
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