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上海信帆提供促激素(TSH)放免實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)

更新時(shí)間:2021-02-24   點(diǎn)擊次數(shù):820次

 上海信帆提供促激素(TSH)放免實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)


通用名:碘[125I]人促激素放射免疫分析藥盒
漢語(yǔ)拼音:Dian [125I] Rencujiazhuangxianjisu Fangshemianyifenxi Yaohe
英文名:Iodine [125I] Human Thyroid Stimulating Hormone Radioimmunoassay Kit
[使用目的]
用于人血清樣本中促激素(TSH)的定量測(cè)定
[試驗(yàn)原理]
促激素(TSH)是含211 個(gè)氨基酸的糖蛋白類激素,分子量約為28,000D,由α
和β兩個(gè)亞基組成。TSH 主要受下丘腦分泌的促激素釋放激素(TRH)和血液中游離
的激素(T3、T4)的調(diào)節(jié)。TRH 可促進(jìn)TSH 的分泌,T3、T4 對(duì)TSH 的分泌起負(fù)反饋
調(diào)節(jié)作用。另外,下丘腦分泌的生長(zhǎng)激素釋放抑制激素(SS)和腎上腺皮質(zhì)分泌的糖皮質(zhì)
激素可降低TSH 的分泌,而雌激素可增加其分泌。
本品采用了第二抗體+聚已二醇沉淀法放射免疫分析試驗(yàn)原理:含促激素(TSH)的樣
品和125I 標(biāo)記的促激素(TSH)與相應(yīng)的抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物。反應(yīng)后加入二
抗及PEG,使免疫復(fù)合物沉淀,離心,測(cè)沉淀放射性計(jì)數(shù)。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣本中促甲
狀腺激素(TSH)的濃度。
[試劑主要組成成分]
1.TSH 標(biāo)準(zhǔn)品:
一套共6 瓶,以不含TSH 的人血清為基質(zhì),用時(shí)輕輕搖勻,需冷存。
TSH 標(biāo)準(zhǔn)品濃度:
A B C D E F (單位)
0 1 5 10 25 50 μIU/mL
2.質(zhì)控品:二瓶,1.0ml/瓶,-20℃凍存(2-8℃保存六周)。。
3.抗TSH 血清: 綠色溶液,需2-8℃冷存。
4.125I-TSH: 紅色溶液,需2-8℃冷存。
5.分離劑: 藍(lán)色溶液,充分搖勻后使用,需2-8℃冷存。
[儀器]
1、γ-計(jì)數(shù)器
2、低溫離心機(jī)
3、恒溫水浴箱
[樣本要求]
110 微升人血清樣本。
采靜脈血5ml 于塑料試管中,靜置使其凝固后,1500 轉(zhuǎn)/分離心,取其上清液,放置玻
璃瓶中。如果樣本不立即使用,可在-18℃~-25℃儲(chǔ)存6 個(gè)月。
嚴(yán)重溶血、高濃度的脂類、膽紅素對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響。
[實(shí)驗(yàn)方法]
操作方法I:
1、將實(shí)驗(yàn)所需試劑及樣本放置室溫,平衡至少30 分鐘以上才可進(jìn)行操作;
2、取60X12mm 聚苯乙烯管進(jìn)行編號(hào),所有實(shí)驗(yàn)均做雙管重復(fù);
3、取每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控血清和樣本200μl 加入相應(yīng)編號(hào)的試管中;
4、除T、NSB 管外,每管均各加入200μl 抗體工作液,充分混勻;
5、37℃溫育1.5 小時(shí);
6、每管均各加入200μl 標(biāo)記物工作液,充分混勻;
7、37℃溫育1 小時(shí);
8、每管均各加入500μl 分離劑后,充分混勻;
9、離心3500 轉(zhuǎn)/分,20 分鐘后,吸去或傾倒掉上清液;
10、用γ-計(jì)數(shù)器測(cè)定每管1 分鐘的放射性強(qiáng)度計(jì)數(shù);
11、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣本及質(zhì)控血清的濃度。
操作方法Ⅰ (OperationⅠ): (單位μL)
T
NSB 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)控品和人樣品
A(B0) B C D E F L H 1 2 3 …..
標(biāo)準(zhǔn)品(STD)
A 200 200
標(biāo)準(zhǔn)品(STD)
B-F 200 200 200 200 200
質(zhì)控品和樣品200 200 200 200 200 ….
抗TSH 血清
混勻,置37℃水浴溫育90 分鐘
125I-TSH
混勻,置37℃水浴溫育60 分鐘
分離劑500
搖勻,3000RPM 離心20 分鐘(溫度低于25℃)
吸去上清液
沉淀物計(jì)數(shù)1 分鐘
操作方法II:
1、將實(shí)驗(yàn)所需試劑及樣本放置室溫,平衡至少30 分鐘以上才可進(jìn)行操作;
2、取60X12mm 聚苯乙烯管進(jìn)行編號(hào),所有實(shí)驗(yàn)均做雙管重復(fù);
3、取每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控血清和樣本200μl 加入相應(yīng)編號(hào)的試管中;
4、每管均各加入200μl 標(biāo)記物工作液;
200
200
5、除T、NSB 管外,每管均各加入200μl 抗體工作液,充分混勻;
6、室溫(20~25℃)放置12~16 小時(shí);
7、每管均各加入500μl 分離劑后,充分混勻;
8、離心3500 轉(zhuǎn)/分,20 分鐘后,吸去或傾倒掉上清液;
9、用γ-計(jì)數(shù)器測(cè)定每管1 分鐘的放射性強(qiáng)度計(jì)數(shù);
10、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣本及質(zhì)控血清的濃度。
操作方法Ⅱ: (單位μL)
T
NSB 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)控品和人樣品
A(B0) B C D E F L H 1 2 3 …..
標(biāo)準(zhǔn)品(STD)
A 200 200
標(biāo)準(zhǔn)品(STD)
B-F 200 200 200 200 200
質(zhì)控品和樣品200 200 200 200 200 ….
抗TSH 血清
125I-TSH
混勻,室溫放置12~16 小時(shí)
分離劑500
搖勻,3000RPM 離心20 分鐘(溫度低于25℃)
吸去上清液
沉淀物計(jì)數(shù)1 分鐘
[實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意]
1、γ-計(jì)數(shù)器本底計(jì)數(shù)應(yīng)≤100CPM/分,效率應(yīng)≥75%;
2、加入放射性標(biāo)記物時(shí),應(yīng)做好防護(hù)、小心謹(jǐn)慎,以避免造成放射性污染;
3、如果某一個(gè)樣本的測(cè)定值高于濃度的標(biāo)準(zhǔn)品濃度,用零標(biāo)準(zhǔn)品以1:2 或1:
4 的比例稀釋樣本后重新測(cè)試,測(cè)試結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
[質(zhì)量控制]
每次實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)至少采用兩個(gè)濃度的質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)量控制,以確保每次實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果
的可靠性。
1、質(zhì)控血清的平均值應(yīng)在允許范圍內(nèi);
2、曲線方程應(yīng)采用擬合方式;
3、重復(fù)樣本的測(cè)定結(jié)果相差在15%以內(nèi)。
如不能同時(shí)滿足以上條件,則此次試驗(yàn)結(jié)果無效,全部試驗(yàn)需重新進(jìn)行。
[測(cè)定結(jié)果的計(jì)算]
200
200
1、計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品(B~G)、質(zhì)控品和樣品與標(biāo)準(zhǔn)品A 的比值(B/B0);
2、劑量-反應(yīng)曲線按“對(duì)數(shù)劑量-結(jié)合率對(duì)數(shù)”(Log(dose-Log(B/Bmax))數(shù)學(xué)模型或
四參數(shù)數(shù)學(xué)模型擬合,通過每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的B/B0 和其濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線;
3、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣本的濃度值,B/B0 不在標(biāo)準(zhǔn)曲線之內(nèi)的樣本及其濃度
[實(shí)驗(yàn)的局限性]
1、本品僅供體外診斷使用,只能用于人血清樣本的測(cè)定而不能用于其他體液樣本;
2、通過其它方法得到的TSH 值與本品測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性;
[產(chǎn)品性能指標(biāo)]
1、靈敏度:
取藥盒中校準(zhǔn)試劑A 點(diǎn)(0 劑量)作10 平行管,求其均值X 及偏差SD,從劑量—反應(yīng)
曲線上查出與X+2SD 相對(duì)應(yīng)的劑量值,確定為本藥盒的靈敏度(小檢出值),為0.25
μIU/mL。
2、精密度:
精密度是質(zhì)量控制的基本參數(shù),用批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)確定。要求批內(nèi)變異系
數(shù)< 10% ,批間變異系數(shù)< 15% 。
批內(nèi)變異系數(shù):指不同濃度的三個(gè)樣品C1、C2、C3 同時(shí)分別進(jìn)行多個(gè)復(fù)管一次測(cè)定中
的重復(fù)性,應(yīng)小于10%。
C1 C2 C3
批內(nèi)變異系數(shù)7.56% 5.34% 5.19%
批內(nèi)變異系數(shù)均小于10%。
批間變異系數(shù):指不同濃度的三個(gè)樣品C1、C2、C3 在多次測(cè)定間的重復(fù)性,應(yīng)小于15%。
C1 C2 C3
批間變異系數(shù)10.38% 9.35% 5.71%
批間變異系數(shù)均小于15%。
3、測(cè)定范圍:
采用零標(biāo)準(zhǔn)品添加高濃度的TSH,確定本試劑盒的測(cè)定范圍為0 ~ 50.0μIU/mL
[注意事項(xiàng)]
1、全部試劑應(yīng)避光貯于2-8℃并在使用前應(yīng)在室溫下(17-27℃)平衡。
2、該產(chǎn)品在制備過程中所用的血清均經(jīng)檢測(cè),他們對(duì)HBsAg、HIV 無反應(yīng)。但即使這樣也
不會(huì)保證對(duì)所有的傳染性因素進(jìn)行檢測(cè)。由于沒有一個(gè)明確的測(cè)試方法能*保證不會(huì)出現(xiàn)
HBsAg、HIV 或其他傳染病毒,所以所有的產(chǎn)品包括來自人體的物質(zhì)都應(yīng)按良好的實(shí)驗(yàn)室規(guī)
B/B0×100 = 標(biāo)準(zhǔn)或樣品(STD or Samples)(CPM)—NSB(CPM)
A 標(biāo)準(zhǔn)(STD)(CPM)—NSB(CPM)
×100
范,按疾病預(yù)防和控制中心的有關(guān)規(guī)定要求進(jìn)行預(yù)防。
3、樣本濃度過高,在分析前用保溫液稀釋,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
4、血清正常值,僅供參考,使用單位應(yīng)建立自己實(shí)驗(yàn)室的正常值。
正常血清參考值0~10 μIU/mL
5、本藥盒標(biāo)準(zhǔn)品濃度用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(衛(wèi)生部生物制品檢定所提供標(biāo)準(zhǔn)80/558)標(biāo)定需乘
以系數(shù)2.3
[規(guī)格] 100 人份/盒
[儲(chǔ)藏]冷凍組份-20℃,冷藏組份2~8℃。
[有效期] 1 個(gè)月

上海信帆提供促激素(TSH)放免實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)

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