正確使用甘油檢測試劑盒
更新時間：2021-04-29 點擊次數：814次上海信帆生物供應的甘油檢測試劑盒是檢測組織和細胞中甘油含量，除此之外我們還有專門檢測液體樣本中甘油含量的試劑盒供應。
描述：甘油是甘油三酯的水解產物。與游離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指標，但檢測更加方便。本試劑盒采用優(yōu)化步驟，能夠檢測實體組織、細胞中的甘油含量，線性范圍為10-1200µmol/L
原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產生過氧化
氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。
適用范圍：測定實體組織、細胞中的甘油濃度。組成 (105 次微板測定或 30 次 1 ml 比色杯測定)：
(1) 裂解液 50 ml
(2) R1 試劑 16 ml
(3) R2 試劑 4 ml
(4) 4 mmol/L 甘油標準品 1 ml
4 ºC，儲存 3 月。
所需設備：酶標儀、生化分析儀或 721、722 型可
見光分光光度計。佳工作波長 550nm，如無此波
長建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530、490nm。
一 組織細胞裂解
細胞(包括分化的脂肪細胞)裂解： 消化、離心收集細胞。或直接在培養(yǎng)皿內裂解。通常6孔板單孔約2x106個細胞，75cm2瓶約1x107細胞。按比例每 1~2 x 106細胞加 0.1ml 裂解液，混勻，靜置 10 分鐘。
動物組織裂解：
切記要預先將新鮮組織剪切稱重后再進行保存。組織凍存后再進行解凍、剪切、稱重可能會產生嚴重的測量誤差。離心管精確稱重，加入組織塊后再稱重，二者相減(即減量稱重法)計算組織量(約 100mg)。強烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質含量變異而產生的誤差。（注意；裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質提?。?。用電動高速勻漿器或手動玻璃勻漿器破碎組織。（不超聲方法，因其不能*和均勻破碎。應根據預實驗調整初始的組織細胞加入量），而后，靜置 10 分鐘。
二. 裂解液處理：
1. 取適量上清液轉移到 1.5ml 離心管中，進行步驟
2 的操作。余下的裂解液可用 BCA 法蛋白定量試劑盒進行蛋白定量或－20ºC 儲存。
2. 70ºC 加熱 10 分鐘滅活脂肪酶，可能出現絮狀沉淀。
3. 室溫 5000rpm 離心 5 分鐘，上層清液即可用于酶學測定。
三 工作溶液配制：按 4:1 比例，取 4 ml 試劑 R1 與1 ml 試劑 R2 混合即可，立即使用或 4ºC 保存<1 天，變色棄去。（注意：謹防來源不明但容易發(fā)生的甘油污染，可來自操作者本人或標準品液體微粒濺射等。）
四 標準品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液*的液體，將 4 mM 甘油標準品倍比稀釋為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125µmol/L，通常取其中 4~6 管即可，注意設置 0 濃度對照反應管。
五 甘油測定
1. 參見下表加樣。待測樣品體積 10µl，多加可能會抑制反應。
2. 37ºC 或 25ºC 反應 10 分鐘。反應平衡后顏色在60 分鐘內穩(wěn)定。
3. 先用蒸餾水+工作液的空白管調零，然后測定各管 OD 值。
4. 繪制標準曲線并計算甘油濃度。
附 Excel 作圖步驟：各標準管 OD 值為 y 軸，標準品濃度為 x 軸。(1)鼠標左鍵圈住數據，點擊做圖向導，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R2 值-。
5. 以每 mg 蛋白濃度或細胞數校正甘油含量。見說明書
說明：
1.維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試。
2.紅細胞糖酵解時合成磷酸甘油影響測定。
參考文獻：
1. Trinder, P. (1969). Ann. Clin. Biochem. 6: 24 – 27.
2. Barham D and Trinder P. (1972). Analyst 97: 142 – 145
甘油檢測試劑盒
