ELISA實驗中標(biāo)本因素對于實驗結(jié)果的影響
更新時間：2024-04-29 點擊次數(shù)：185次ELISA實驗中標(biāo)本因素對于實驗結(jié)果的影響
以辣根過氧化物酶（HRP）為標(biāo)記的ELISA測定中，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性，催化底物顯色造成假陽性；混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈；如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)；標(biāo)本凝固不全，在研究試驗中，有時為了爭取時間而快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；采血試管洗滌不*、反復(fù)使用易交叉污染；塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。
因此血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測，禁用嚴(yán)重溶血的標(biāo)本。一般說來，在5 d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于2～8℃，標(biāo)本在冰箱中保存時間過長易導(dǎo)致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深。超過1周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。
反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存做多次檢測，宜少量分裝冰存；使用一次性玻璃試管或真空采血管；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會增加OD值，可能與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷，能吸附酶標(biāo)記物，不易洗脫有關(guān)；EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性；血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時用帶分離膠或一次性真空促凝采血管。
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