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改良吉姆薩染色

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服務(wù)介紹:
組織切片及細(xì)胞涂片經(jīng)吉姆薩染色后,各類細(xì)胞由于其成份的差異而呈現(xiàn)出不同的著色,從而達到分辨各類細(xì)胞的目的。本項目為改良吉姆薩染色,適用于血涂片,肺泡灌洗液細(xì)胞滴片,骨髓細(xì)胞涂片,石蠟切片和冰凍切片的染色,染色目的多為觀察各類炎性細(xì)胞的特征及數(shù)量分布。

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服務(wù)介紹:

組織切片及細(xì)胞涂片經(jīng)吉姆薩染色后,各類細(xì)胞由于其成份的差異而呈現(xiàn)出不同的著色,從而達到分辨各類細(xì)胞的目的。本項目為改良吉姆薩染色,適用于血涂片,肺泡灌洗液細(xì)胞滴片,骨髓細(xì)胞涂片,石蠟切片和冰凍切片的染色,染色目的多為觀察各類炎性細(xì)胞的特征及數(shù)量分布。

實驗流程:

涂片/組織切片-改良吉姆薩染色-脫水封片-顯微鏡鏡檢

結(jié)果判讀:

細(xì)胞類型

細(xì)胞特征及染色結(jié)果

成熟紅細(xì)胞

圓餅狀,粉紅色,無核

中性粒細(xì)胞

細(xì)胞核藍色,呈馬蹄形,桿狀或分葉形;胞質(zhì)淡紫紅色

嗜酸性顆粒

細(xì)胞核藍色,呈馬蹄形,桿狀或分葉形;胞質(zhì)內(nèi)深紅色顆粒

嗜堿性粒細(xì)胞

細(xì)胞核藍色,呈馬蹄形,桿狀或分葉形;胞質(zhì)內(nèi)藍紫色顆粒

淋巴細(xì)胞

細(xì)胞較小,核藍色小而圓;細(xì)胞質(zhì)較少呈藍紫色

單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞

細(xì)胞較大,細(xì)胞核藍色大而圓;細(xì)胞質(zhì)淺藍紫色

 

樣本準(zhǔn)備方法及送樣運輸要求(為保證染色成功率,血液、肺泡灌洗液、骨髓樣本建議客戶按以下方法自行涂片固定后送樣):

1.涂片的制作方法:

1.1 血涂片制備:

1)取新鮮血液(若用抗凝管收集的血液,放置最好不要超過24h,否則血液中白細(xì)胞的數(shù)量以及種類會明顯減少),選用干凈的粘附玻片,用移液槍吸取10ul的血液,滴加在玻片的一側(cè)(一般都是磨砂對側(cè))

2)再取一片輔助玻片(也可選用蓋玻片,依據(jù)個人手的力道習(xí)慣選擇),以45°角將其寬邊靠近血液,血液沿著接觸邊緣向兩邊暈開,當(dāng)兩邊都到達邊緣時,輕輕地穩(wěn)健且勻速地推向磨砂面一側(cè),進行涂片,然后快速果斷地拿走載玻片。可見涂片首尾分明,厚薄均勻。(一般情況下,涂抹速度力道適中的話,取走玻片時載玻片上的血幾乎無殘留,且涂抹出的血涂片無明顯細(xì)胞破碎,變形。在顯微鏡下可觀察到細(xì)胞呈單個緊密排列,整體比較均勻。)

3)自然晾干后,用甲醇浸泡固定15min,自然晾干后4℃保存運輸。

1.2 肺泡灌洗液和骨髓涂片制備:

1)取細(xì)胞懸液,2800r 4℃離心5min去上清。若沉淀紅色較多,則需要用紅細(xì)胞裂解液(G2015)裂解紅細(xì)胞。細(xì)胞沉淀加入紅細(xì)胞裂解液200ul,渦旋混勻,放在冰上裂解2min后加入1ml PBS終止裂解。2800r 4℃離心5min去上清后加PBS重懸。若沉淀紅色不多,則不需要裂解紅細(xì)胞,直接棄上清液,加PBS重懸。根據(jù)細(xì)胞沉淀量對應(yīng)加入PBS:

①若肉眼觀察無明顯細(xì)胞沉淀,直接加入50ul PBS,用移液槍吹打混勻后,涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的小圓圈中(3cm×2cm的橢圓);

②若細(xì)胞沉淀量為綠豆大小,加入200ul PBS,用移液槍吹打混勻后,吸取50ul,涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的小圓圈中(3cm×2cm的橢圓);

③若細(xì)胞沉淀量很多,黃豆大小或更大,加入1ml PBS,用移液槍吹打混勻后,吸取150ul,涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的大圓圈中(最大長邊約5cm,最大短邊約2cm的橢圓)。在顯微鏡下觀察細(xì)胞量的多少,若還是過厚,再用PBS對倍稀釋該細(xì)胞懸液,直至在顯微鏡下觀察到細(xì)胞量涂布均勻。

2)用移液槍將細(xì)胞懸液鋪滿整個圓圈,涂片放置自然晾干(因細(xì)胞未經(jīng)固定,不可通過烘箱加快晾干)。

3)將晾干后的涂片放入丙酮中浸泡固定1min,自然風(fēng)干,4℃保存運輸。

2. 石蠟切片常溫運輸,冰凍切片-20℃運輸。

樣本種類

預(yù)處理過程

固定條件

保存運輸條件

備注

血液

5-10ul血液涂片

甲醇固定15min后自然晾干

4℃保存運輸

血液要用抗凝管采集,取血后立即涂片固定

肺泡灌洗液,骨髓

50-150ul細(xì)胞懸浮液涂片

 

 

丙酮固定1min后自然晾干

 

4℃保存運輸

 

樣品中紅細(xì)胞較多需要裂解紅細(xì)胞,取樣后立即涂片固定



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