ALP堿性磷酸酶染色（偶氮偶聯(lián)法）

服務(wù)介紹：

堿性磷酸酶是廣泛分布于人體肝臟、骨骼、腸、腎和胎盤等組織經(jīng)肝臟向膽外排出的一種酶。這種酶能催化核酸分子脫掉5’磷酸基團(tuán)，從而使DNA或RNA片段的5’-P末端轉(zhuǎn)換成5’-OH末端。但它不是單一的酶，而是一組同工酶。已發(fā)現(xiàn)有 ALP1、ALP2、ALP3、ALP4、ALP5與 ALP6六種同工酶。其中第1、 2、6 種均來自肝臟，第3種來自骨細(xì)胞，第4種產(chǎn)生于胎盤及癌細(xì)胞，而第5種則來自小腸絨毛上皮與成纖維細(xì)胞。正常的骨代謝是通過成骨細(xì)胞生長與破骨細(xì)胞建立骨吸收而維持平衡。成骨細(xì)胞的標(biāo)記酶是堿性磷酸酶（ALP），酶活性的變化是成骨細(xì)胞生理現(xiàn)象的重要標(biāo)志。在骨代謝研究領(lǐng)域被用作骨形成重要指標(biāo)之一。

本實驗采用偶氮偶聯(lián)法來顯示堿性磷酸酶活性，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色（藍(lán)色）產(chǎn)物，以此證明酶的定位。

實驗大體流程：

骨組織PFA4℃固定保存一周內(nèi)（24h-48h）——骨組織用我司EDTA脫鈣液4℃低溫脫鈣——脫水浸蠟包埋石蠟切片——石蠟切片脫蠟至水——提前配制過濾的ALP染色液染色——烘箱烤片——中性樹膠封片。

結(jié)果判讀：

骨組織沿骨膜內(nèi)整齊排列的矮柱狀成骨細(xì)胞呈藍(lán)色，軟骨處呈藍(lán)色，骨小梁邊緣呈藍(lán)色，細(xì)胞核呈紅色。

其他軟組織含堿性磷酸酶的細(xì)胞呈藍(lán)色，細(xì)胞核呈紅色。

送樣運輸要求：

1、做ALP染色的組織需要用PFA 4℃固定保存運輸，固定一周內(nèi)脫水包埋切片染色。室溫固定數(shù)小時就會影響酶活，4℃固定超過一周也會影響酶活，導(dǎo)致陽性減弱甚至丟失。

2、染ALP的骨組織需要使用我司EDTA脫鈣液4℃低溫脫鈣。其他脫鈣液脫鈣的組織，不保證染色結(jié)果。用酸性脫鈣液脫鈣的骨組織，酶失活陽性丟失。建議在我司進(jìn)行骨組織的全套脫鈣制片和染色。

3、不脫鈣骨組織前期樣本制片處理方式對ALP酶活影響較大，不脫鈣骨組織切片和切磨片目前不建議做此染色。

ALP堿性磷酸酶染色（偶氮偶聯(lián)法）