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一氧化氮（NO）（硝酸還原酶法）實(shí)驗(yàn)代測(cè)

測(cè)定原理:
NO化學(xué)性質(zhì)活潑,在體內(nèi)代謝很快轉(zhuǎn)為NO2¯和NO,而NO2¯又進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為NO3¯,本法利用硝酸還原酶特異性將NO3¯還原為NO2¯,通過顯色深淺測(cè)定其濃度的高低。

一氧化氮為氮氧化合物，化學(xué)式NO， 相對(duì)分子質(zhì)量30.01，氮的化合價(jià)為+2。是一種氣體難溶于水的有體。由于一氧化氮帶有自由基，這使它的化學(xué)性質(zhì)非?；顫姟．?dāng)它與氧氣反應(yīng)后，可形成具有腐蝕性的氣體——二氧化氮（NO2），二氧化氮可與水反應(yīng)生成硝酸。方程式為：3NO2+H2O==2HNO3+NO。

　NO化學(xué)性質(zhì)活潑，體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為硝酸鹽（NO3¯）和亞硝酸鹽（NO2¯），血清(NO3¯)與(NO2¯)濃度之和（NO3¯┼NO2¯）才能準(zhǔn)確代表體內(nèi)(NO)水平。血清（NO3¯┼NO2¯）含量測(cè)定，國(guó)內(nèi)有的單位采用金屬鎘還原法，但該法操作繁瑣（血清需除蛋白），反應(yīng)不易控制（金屬鎘可將NO2¯進(jìn)一步還原），且不能*將NO3¯還原為 NO2¯，準(zhǔn)確性差。
本測(cè)試法為一種靈敏、簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定、易推廣的方法。
NO化學(xué)性質(zhì)活潑，在體內(nèi)代謝很快轉(zhuǎn)為NO2¯和NO3¯，而NO2¯又進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為NO3¯，本法利用硝酸還原酶特異性將NO3¯還原為NO2¯，通過顯色深淺測(cè)定其濃度的高低。

產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下：1、快速簡(jiǎn)便：全程約2小時(shí)，可測(cè)100例以上樣本。
2、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放3個(gè)月有效。
3、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。
4、回收試驗(yàn)： X =103.3%。
5、受外界影響因素小：干擾因素少，重復(fù)性強(qiáng)。
6、測(cè)試面廣：可測(cè)動(dòng)物血液、組織、細(xì)胞、各種培養(yǎng)細(xì)胞、腦脊液、胸水、腹水、尿液、胃液、植物組織以及各種水產(chǎn)效果均佳。所需儀器及自備試劑：
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀（比色測(cè)定波長(zhǎng)為550nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
3、漩渦混勻器
4、臺(tái)式離心機(jī)
5、微量移液器

樣本收集與前處理：
血清（漿）可直接測(cè)定。
紅細(xì)胞：需按照試劑盒中說明書上紅細(xì)胞的測(cè)定方法進(jìn)行提取后測(cè)定。
動(dòng)物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測(cè)定。
培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說明書。

操作流程：
1、按步驟加入樣本和R1、R2混合試劑，37℃水浴60分鐘
2、加入R3、R4，抽提室溫靜置40分鐘，3500～4000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘
3、取上清0.5 ml，加入顯色劑，靜置10分鐘，550nm波長(zhǎng)，0.5cm光徑

一氧化氮（NO）（硝酸還原酶法）實(shí)驗(yàn)代測(cè)