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己糖激酶（HK）實驗代測

己糖激酶（hexokinase,HK）是一種轉移酶，專一性不強，受葡萄糖-6-磷酸和ADP的抑制，Km（米氏常數(shù)）小、親和性強，可以針對多種六碳糖進行作用。
測定原理：應用6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G-6-PD）的偶聯(lián)反應，在提供足量的底物條件下生成NADPH，在340nm波長處，通過測定吸光度的增加值來反應HK的活性?！?br />已糖激酶廣泛存在于以糖為能源的細胞，但在酵母、肝臟、肌肉、腦等多。該酶可被結晶化。動物的已糖激酶是作為同工酶而存在的。已糖激勵機制酶遺傳性缺乏是導致非球形細胞溶血性貧血的原因之一。建立紅細胞HK的測定方法對研究不明原因的溶血極為重要。
應用6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G-6-PD）的偶聯(lián)反應，在提供足量的底物條件下，在340nm波長處，通過測定吸光度的增加值來反映HK的活性。
產(chǎn)品優(yōu)點如下：
1、快速簡便：全程約1小時，可測50例左右樣本。
2、取樣量微：本法取樣量僅為50l。
3、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放3個月有效。
4、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.2%。
5、回收試驗： X =103%。
6、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復性強。
7、測試面廣：可測動物血清(漿)、組織    、紅細胞（有單獨試劑盒）以及各種水產(chǎn)等，效果均佳。
所需儀器及自備試劑：
1、紫外分光光度計（比色測定波長為340nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱（溫度為37℃）
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理：
血清（漿）可直接測定。
動物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測定。
培養(yǎng)細胞：常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。
操作流程：
1、按說明書操作將配好的混合液37℃水浴10分鐘后加R5和樣本50l
2、340nm波長，0.5cm光徑，測得OD值為A1
3、20分鐘340nm波長，0.5cm光徑，測得OD值為A2

己糖激酶（HK）實驗代測