堿性磷酸酶染液(鈣鈷法) 生化試劑
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堿性磷酸酶染液(鈣鈷法),CAKP 在 pH值 9.4 的環(huán)境下,以鎂離子作為激活劑,能夠把B-甘-油磷酸鈉水解出磷酸,磷酸與高濃度的鈣鹽結合形成無色的磷酸鈣,再與硝酸鉆作用形成磷酸鉆,經硫化胺處理形成黑色的硫化鉆沉淀在酶活性處。
堿性磷酸酶染液(鈣鈷法)
( Cell alkaline phosphatase staincAkP)
檢驗原理
CAKP 在 pH值 9.4 的環(huán)境下,以鎂離子作為激活劑,能夠把B-甘-油磷酸鈉水解出磷酸,磷酸與高濃度的鈣鹽結合形成無色的磷酸鈣,再與硝酸鉆作用形成磷酸鉆,經硫化胺處理形成黑色的硫化鉆沉淀在酶活性處。
基質液的配制:試劑二基質液 A: 試劑三基質液 B=20:1,混勻后待用,用多少配多少,滴染法每片只需基質液 A200,基質液 B10l,配好的基質液應為無色透明液體,盡快使用。試劑五的保存:試劑五需-20℃保存,必須在收到試劑后立即根據(jù)實驗需要分裝凍存,以避免反復凍融而導致試劑失效。
儲存條件及有效期
本試劑盒中試劑五需置-20℃保存,其余試劑應置 2℃~8℃密封保存,有效期 6個月。
樣本前處理
石蠟切片脫蠟及再水合:
1. 脫蠟:將石蠟切片放入 37℃~60℃的保溫箱中 10 分鐘左右,再放入二甲苯或無毒環(huán)保脫蠟劑 10 分鐘,再放入二甲苯或無毒環(huán)保脫蠟劑 5 分鐘。(本所有無毒環(huán)保脫蠟劑供應,可代替二甲苯,若使用本所無毒環(huán)保脫蠟劑,脫蠟時間調整為15 分鐘X2 次);
2. 水合:將已脫蠟的切片放入 95%乙醇2分鐘-75%乙醇 2分鐘-30%乙醇 2分鐘一蒸餾水洗 2 分鐘X3 次:
染色步驟
可用滴染法也可選用染缸法,樣本量少可用滴染法,樣本多可用染缸法
一、固定及水潤
1.新鮮血涂片、骨髓涂片、細胞涂片或爬片、用試劑一進行固定約 2~5 分鐘,自然晾干。待染(冰凍切片及石蠟切片按常規(guī)處理,不需要固定);
2.水潤: 固定后的樣本及已脫蠟并水合的組織切片,請在染色前將樣本切片用蒸餾水潤洗30 秒,以保持濕潤;
二、滴染法
1.滴加基質液數(shù)滴,覆蓋已處理好的樣本上, 37℃避光孵育 15 分鐘左右,甩掉多余的染液,不要水洗;
2.立即滴加試劑四染液染色 5 分鐘,水洗 30 秒,甩去多余的水,但要保持樣本濕潤;
3.再滴加試劑五染色 30 秒左右,水洗 30 秒,甩去多余的水,但要保持樣本濕潤;
4.滴加試劑六復染 30 秒,水洗 30 秒,甩干,鏡檢;
三、染缸法
1.將將玻片放入基質液染缸中,37℃避光孵育 15 分鐘,不要水洗
2.將玻片轉移至試劑四染液染缸中染色 5 分鐘,水洗 30 秒,甩去多余的水,但要保持樣本濕潤;
3.再放入試劑五染液染缸中染色 30~60 秒左右,水洗 30 秒,甩去多余的水,但要保持樣本濕潤;
4.再放入試劑六染缸中染色 30 秒,水洗 30 秒,甩干,鏡檢;
染色結果
胞質中陽性反應呈現(xiàn)灰黑色顆粒或塊狀、條狀沉淀。
堿性磷酸酶染液(鈣鈷法)