谷-胱甘肽還原酶(GR)測試盒(50 管/48 樣) 生化試劑
- 型 號:
- 參考價:0~0
谷-胱甘肽還原酶(GR)測試盒(50 管/48 樣),是一種黃素酶,每分子酶蛋白含有一分子的 FAD。由輔酶 NADPH 供氫,催化氧化型谷-胱甘肽(GSSG),還原成還原型谷-胱甘肽(GSH)。
谷-胱甘肽還原酶(GR)測試盒(50 管/48 樣)
(50 管/48 樣)
一、測定意義:
谷-胱甘肽還原酶(Glutathione Reductase)是一種黃素酶,
每分子酶蛋白含有一分子的 FAD。由輔酶 NADPH 供氫,
催化氧化型谷-胱甘肽(GSSG),還原成還原型谷-胱甘肽
(GSH)。還原型谷-胱甘肽(GSH)可使含巰基(-SH)的
酶處于還原狀態(tài)及活性狀態(tài),維持紅細胞膜的完整性,防止
血紅蛋白氧化。
GR 定位于微粒體及細胞液部分。因各臟器的組織細胞
普遍含有 GR,因而 GR 在機體的氧化還原反應中起了舉足
輕重的地位。
二、測定原理:
氧化型谷-胱甘肽(GSSG)在谷-胱甘肽還原酶 GR 的催
化下,由 NADPH 供氫,使 GSSG 還原生成還原型谷-胱甘肽
(GSH)后,GSH 增加,NADPH 減少。在 340nm 處可檢測到
NADPH 的吸光度值的下降。
三、試劑組成:(50 管/48 樣)
試劑一:60mL×2 瓶,4℃保存 6 個月。
試劑二:粉劑×4 支,
4℃保存 6 個月;用時每支加雙蒸水 1mL
充分溶解后備用,4℃保存。
試劑三:粉劑×2 支,
4℃保存 6 個月;用時每支加雙蒸水 1mL
充分溶解后備用,-20℃以下保存。
工作液的配制:按試劑一︰試劑二︰試劑三=2300︰60︰30
的比例進行配制,用多少配多少,現(xiàn)用現(xiàn)配,余下
的 4℃保存 4~5 天(使用前在 37℃預溫 5 分鐘)。
四、血清(漿)中 GR 活力的測定:
1、血清(漿)樣本前處理:
血清不需要離心;血漿要 2000~3000 轉(zhuǎn)/分,離心 8 分鐘。
2、血清(漿)中 GR 活力測定的操作過程:
①、將紫外分光光度計于 340nm 處,1cm 光徑石英比色皿,
用雙蒸水調(diào)零;(石英比色皿準備兩只,一只用于調(diào)零,
一只用于測定)。
②、往相應編號的試管中加入 50μL 新鮮血清(漿),吸取
工作液 2.4mL 沖入試管中,快速混勻,并計時;
③、迅速倒入石英比色皿中,紫外分光光度計,340nm 處
比色,30 秒時讀取吸光度值 A1;
④、將此反應液倒入原試管中置 37℃準確水浴 2 分鐘,再
迅速倒入石英比色皿中,
2 分 30 秒時讀取吸光度值 A2;
⑤、求出 2 次吸光度差值(△A=A1-A2)。
[注]:第一次讀數(shù)時的時間可以不固定(20 秒、40 秒等都可
以,但不要太長),只要讀 A1 和 A2 之間的時間差為
2 分鐘即可;如果 A1 和 A2 值接近,可以增加樣本體
積,或者延長反應時間(如 5min 或 10min)。
3、血清(漿)中 GR 的計算:
①、血清(漿)中 GR 的活力單位定義:
每升血清(漿)每分鐘使反應體系中底物 NADPH
的濃度改變 1mM 所需的酶量為一個酶活力單位。
6.22 為 NADPH 在 340nm 波長 1cm 光徑的消光系數(shù)。
d:比色光徑,1cm;
T:反應時間,2min;
V 樣:取樣量,0.05mL。
五、組織勻漿中 GR 活力的測定:
1、組織樣本的前處理:
準確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9 的
比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機械勻漿,
制成 10%的組織勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清
液待測
2、組織中 GR 活力測定的操作過程:
①、將紫外分光光度計于 340nm 處,1cm 光徑石英比色皿,
用雙蒸水調(diào)零;(石英比色皿準備兩只,一只用于調(diào)零,
一只用于測定)。
②、往相應編號的試管中加入 20μL 組織勻漿上清液,吸取
工作液 2.4mL 沖入試管中,快速混勻,并計時;
③、迅速倒入石英比色皿中,紫外分光光度計,340nm 處
比色,30 秒時讀取吸光度值 A1;
④、將此比色液倒入原試管中置 37℃準確水浴 2 分鐘,再
迅速倒入石英比色皿中,
2 分 30 秒時讀取吸光度值 A2;
⑤、求出 2 次吸光度差值(△A=A1-A2)。
[注]:第一次讀數(shù)時的時間可以不固定(20 秒、40 秒等都可
以,但不要太長),只要讀 A1 和 A2 之間的時間差為
2 分鐘即可;如果 A1 和 A2 值接近,可以選擇更大的
樣本濃度,或者延長反應時間(如 5min 或 10min)。
3、組織勻漿中 GR 活力單位的計算:
①、組織勻漿中 GR 活力單位的定義:
每克組織蛋白每分鐘使反應體系中底物 NADPH 的
濃度改變 1mM 所需的酶量為一個酶活力單位。
6.22 為 NADPH 在 340nm 波長 1cm 光徑的消光系數(shù)。
d:比色光徑,1cm;
T:反應時間,2min;
V 樣:取樣量,0.05mL;
N:樣本測試前稀釋倍數(shù)。
Cpr:組織勻漿蛋白濃度,gprot/mL(prot 指蛋白);
谷-胱甘肽還原酶(GR)測試盒 (50 管/48 樣)