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丙二醛(MDA)測試盒(TBA 法) 生化試劑

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丙二醛(MDA)測試盒(TBA 法),是在國內(nèi)外眾多測試方法的基礎(chǔ)上改進(jìn)的一種微量、快速、簡便、準(zhǔn)

確、對操作人員健康無損害的測試方法。通過測試可反映出血清(漿)、乳汁等細(xì)胞

外液、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞以及各種動植物的細(xì)胞水平及亞細(xì)胞水平的脂質(zhì)

過氧化物的量。

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丙二醛(MDA)測試盒(TBA 法)

(貨號:A003-1 TBA 法)

本試劑盒是在國內(nèi)外眾多測試方法的基礎(chǔ)上改進(jìn)的一種微量、快速、簡便、準(zhǔn)

確、對操作人員健康無損害的測試方法。通過測試可反映出血清(漿)、乳汁等細(xì)胞

外液、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞以及各種動植物的細(xì)胞水平及亞細(xì)胞水平的脂質(zhì)

過氧化物的量。

一、測定意義:

機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基,后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂

肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA),引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用,并因此形成脂質(zhì)過

氧化物。如:醛基(丙二醛 MDA)、酮基、羥基、羰基、氫過氧基或內(nèi)過氧基,以

及新的氧自由基等。脂質(zhì)過氧化作用不僅把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑,即非自由基

性的脂類分解產(chǎn)物,而且通過鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng),放大活性氧的作用。因此,初

始的一個活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成,這些分解產(chǎn)物中,一些是無害的,

另一些則能引起細(xì)胞代謝及功能障礙,甚至死亡。氧自由基不但通過生物膜中多不

飽和脂肪酸(PUFA)的過氧化引起細(xì)胞損傷,而且還能通過脂氫過氧化物的分解產(chǎn)

物引起細(xì)胞損傷。因而測試 MDA 的量常??煞从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度,間接

地反映出細(xì)胞損傷的程度。

MDA 的測定常常與 SOD 的測定相互配合,SOD 活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清

除氧自由基的能力,而 MDA 的高低又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程

度,通過 SOD MDA 的結(jié)果分析有助于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥理及工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展。

二、測試原理:

過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛 MDA)可與硫代巴-比妥酸 (TBA) * 縮合,

形成紅色產(chǎn)物, 532nm 處有吸收峰。因底物為硫代巴-比妥酸(Thibabituric Acid

TBA)所以此法稱 TBA 法。

三、測試所需儀器設(shè)備:

可見光分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀,可調(diào)到 95℃左右的恒溫水浴箱或沸水鍋,離心機(jī),

10mL 離心管。

四、試劑盒組成與配制(50 /48 A003-1-1)

試劑一:液體 10mL×1 瓶,室溫保存。(天冷時會凝固,每次測試前可 37℃加熱

以加速溶解,直至透明方可應(yīng)用)。

試劑二:液體 6mL×1 瓶,用時每瓶加 170mL 蒸餾水混勻,4℃冷藏。(注意不

要碰到皮膚上)。

試劑三:粉劑×1 支,用時將粉劑加蒸餾水 30mL,加熱到 90℃~100℃充分溶解

后用蒸餾水補(bǔ)足至 30mL,再加冰醋酸 30mL,混勻,配好的試劑避光

冷藏。

標(biāo)準(zhǔn)品10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶,4℃冷藏。

[注]:冰醋酸(分析純,乙酸濃度≥99.5%);測試盒冷藏至少可保存一年。

五、試劑盒組成與配制(100 /96 A003-1-2):

試劑一:液體 20mL×1 瓶,室溫保存。(天冷時會凝固,每次測試前可 37℃加熱

以加速溶解,直至透明方可應(yīng)用)。

試劑二:液體 12mL×1 瓶,用時每瓶加 340mL 蒸餾水混勻,4℃冷藏(注意不

要碰到皮膚上)。

試劑三:粉劑×1 支,用時將粉劑加蒸餾水 60mL,加熱到 90℃~100℃充分溶解

后用蒸餾水補(bǔ)足至 60mL,再加冰醋酸 60mL,混勻,配好的試劑避光

冷藏。

標(biāo)準(zhǔn)品10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶,4℃冷藏。

[注]:冰醋酸(分析純,乙酸濃度≥99.5%);測試盒冷藏至少可保存一年。

六、操作步驟:

1、操作表:

111.png

離心管蓋上蓋,用針在蓋上扎一小孔,旋渦混勻器混勻,95℃水浴(或用鍋開

蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻,然后 35004000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,(3000

轉(zhuǎn)/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***532nm 處,1cm 光徑,

蒸餾水調(diào)零,測各管吸光度值。

[]a*:表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無水乙醇的量、試劑一的量,四者均相等。

a*一般取 0.1-0.2mL

例如樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、試劑一也取 0.1mL,若樣品取

0.2mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正

比曲線,故結(jié)果不受影響。

** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 12只,若樣本不存在

溶血、脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。

*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以

免沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。

2、參考取樣量:血清(漿)取 0.10.2mL。低密度脂蛋白懸液取 0.10.2mL 。食

油取 0.03mL。肝組織、心肌、肌肉組織、螺旋藻等,取 5%或 10%

勻漿 0.10.2mL 較好。

3、標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL 時,則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸

光度減去空白管的吸光度為 0.0650.070(酶標(biāo)儀測定取 200μl 讀數(shù)時為 0.04

左右)。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL 時,則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度為

0.1300.140(酶標(biāo)儀測定取 200μl 讀數(shù)時為 0.08 左右)。

4、規(guī)范操作方法及簡便操作方法中,若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度太低,可以將水浴時間

40 分鐘延長至 80 分鐘,但您的同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80 分鐘,

以免造成批間差異。

222.png

 

333.png

 

以免沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。

[ 2]以上規(guī)范操作法及簡便操作法適用于人及各種動植物的樣本(包括血清、動

植物組織及體液、細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液等)。

[ 3]規(guī)范操作方法及簡便操作方法中,若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度太低,可以將水浴

時間 40 分鐘延長至 80 分鐘,但您的同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至

80 分鐘,以免造成批間差異。

444.png

 

(一)、樣本前處理見實(shí)驗(yàn)方法學(xué)中的組織勻漿處理,可制成 10% 5%的勻漿,

但要注意,因樣本量很少,所以做好的組織勻漿不要離心,例如培養(yǎng)

的細(xì)胞等破碎后可以不離心。取樣時注意要搖勻后立即取樣。

(二)、試劑組成與配制:

1、(100 )微量操作法中的試劑三配制如下:

①、按規(guī)范操作方法來配制 MDA 3 號試劑:將 1 MDA 3 號粉劑倒入燒杯

內(nèi)加 90℃100℃的熱蒸餾水 64mL*,充分溶解(溶解過程中可適當(dāng)加熱)。

冷卻后加冰醋酸 60mL 混勻。

②、再將上述配好的 MDA 3 號試劑用 50%冰醋酸** 2:1 進(jìn)行稀釋,用多少配

多少。例如您需要用微量法測 MDA 需要試劑三為 15mL,則可以取上述按規(guī)

范操作法配好的試劑三 10mL 50%冰醋酸 5mL,混勻即可。配好的試劑避

4℃冰箱冷藏(冰醋酸自備)。

[注]:* 因蒸餾水熱脹冷縮,加熱過程要蒸發(fā),本應(yīng)加 60mL,現(xiàn)多加 4mL,

冷卻后在 60mL。

** 50%冰醋酸的配制是 50mL 蒸餾水加 50mL 冰醋酸混合而成的。

*** 冰醋酸又名乙酸,分析純,乙酸濃度≥99.5%。

2(50 )微量操作法中的試劑三配制如下:

①、按規(guī)范操作方法來配制 MDA 3 號試劑:將 1 MDA 3 號粉劑倒入燒杯內(nèi)

90℃100℃的熱蒸餾水 32mL*,充分溶解(溶解過程中可適當(dāng)加熱)。

冷卻后加冰醋酸 30mL 混勻。

②、再將上述配好 MDA 3 號試劑用 50%冰醋酸按 2:1 進(jìn)行稀釋,用多少配多少。

例如您需要用微量法測 MDA 需要試劑三為 15mL,則可以取上述按規(guī)范操作

法配好的試劑三 10mL 50%冰醋酸 5mL,混勻即可。配好的試劑避光 4℃

冰箱冷藏(冰醋酸自備***)。

[注]:* 因蒸餾水熱脹冷縮,加熱過程要蒸發(fā),本應(yīng)加 30mL,現(xiàn)多加 2mL,

冷卻后在 30mL。

** 50%冰醋酸的配制是 50mL 蒸餾水加 50mL 冰醋酸混合而成的。

*** 冰醋酸又名乙酸,分析純,乙酸濃度≥99.5%

(三)、操作步驟:

555.png

離心管蓋上蓋,用針在蓋上扎一小孔,旋渦混勻器混勻,95℃水?。ɑ蛴缅侀_

蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻,然后 35004000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,(3000

轉(zhuǎn)/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***532nm 處,1cm 光徑,

蒸餾水調(diào)零,測各管吸光度值。

a*表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無水乙醇的量、試劑一的量,四者均相等。例如

樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取 0.1mL,若樣品取 0.2mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、

無水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正比曲線,因而結(jié)果不受影響。

** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 12 只,若樣本不存

在溶血、脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。

*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以免

沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。

1 :用此方法所測各管吸光度值比規(guī)范操作方法要高,但不影響最終結(jié)果。

2 5%組織勻漿 a* 0.10.2mL 進(jìn)行檢測較好。

③:若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度太低,可以將水浴時間 40 分鐘延長至 80 分鐘,

但您的同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80 分鐘,以免造成批間

差異。

④:此方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL 時,則標(biāo)準(zhǔn)管吸光

度減去空白管吸光度為 0.1030.112。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL 時,則

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管吸光度為 0.2060.224。

()、計(jì)算公式及舉例:

666.png

 

777.png

 

樣本、試劑一為相同量。

** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 12 只,若樣本不存在溶血、

脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。

*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以免

沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。

2、標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL 時,則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管

吸光度減去空白管的吸光度為 0.0650.070(酶標(biāo)儀測

定取 200μl 讀數(shù)時為 0.045 左右)。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為

0.2mL 時,則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度為

0.1300.140(酶標(biāo)儀測定取 200μl 讀數(shù)時為 0.1 左右)。

888.png

 

999.png

1.png

旋渦混勻器混勻,離心管口用保鮮薄膜扎緊,用針頭刺一小孔,95℃水?。ɑ?/span>

用鍋開蓋煮沸)80 分鐘,取出后流水冷卻,然后 35004000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,

3000 轉(zhuǎn)/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***,532nm 處,1cm

光徑,蒸餾水調(diào)零,測各管吸光度值。

a*為樣本取樣量,標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、樣本量均相等,生理鹽水的量為樣本的兩

倍,試劑一的量為樣本的四倍。例如高脂血清取 0.1mL,則標(biāo)準(zhǔn)品,無水乙

醇取 0.1mL,生理鹽水取 0.2mL,試劑一取 0.4mL。

** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 12 只,若樣本不存在溶

血、脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。

*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以免

沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。

3、標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:此方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL

時,則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸

光度為 0.1130.122。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL 時,

則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度

0.2160.234。

2.png

 

離心管蓋上蓋,用針在蓋上扎一小孔,旋渦混勻器混勻,95℃水浴(或用鍋開

蓋煮沸)80 分鐘,取出后流水冷卻,然后 35004000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,(3000

轉(zhuǎn)/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***,532nm 處,1cm 光徑,

蒸餾水調(diào)零,測各管吸光度值。

a* 為樣本取樣量,標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、樣本量均相等,試劑一的量為樣本的

三倍。例如高脂血清取 0.1mL,則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇取 0.1mL,試劑一取

0.3mL。

** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 12 只,若樣本不存

在溶血、脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。

*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,

以免沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。

2、標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:此方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL

時,則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸

光度為 0.1140.123。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL 時,

則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度

0.2160.235

3.png

十、紅細(xì)胞中的 MDA 檢測方法

(一)、微量紅細(xì)胞中的 MDA 檢測方法(樣本量少時用)

1、樣本前處理:(可用以下二種方法中的一種)

1)、載玻片取全血,進(jìn)行 MDA 測定:

如果您所需測的血樣很少又很珍貴,例如新生兒指血,或小老鼠的尾血,可采

用載玻片上滴加 12 滴肝素涂勻,60oC 以下烤干,或自然吹干。將以上采取的少

量血樣滴在有肝素的載玻片上,用微量加樣器取您所需的血量,再制備成 199

溶血液。(即全血︰蒸餾水=199

2)、玻璃微量采血管采集紅細(xì)胞及溶血液的制備:

①、 20μl 的玻璃微量采血管取載玻片上的肝素抗凝全血 20μl 左右。將玻璃毛細(xì)采

血管置水平位,迅速取下吸球,將空隙長的一端放在酒精燈火焰的三分之一處

燒至透紅,管端變成圓球狀閉結(jié)為止。用尺測量并記錄血柱長度 a 厘米。用紙

將采血管卷好,然后將采血管封閉端朝下裝入離心管中,1500 轉(zhuǎn)/分離心 510

分鐘,取出后用小砂輪在血清與紅細(xì)胞分界處劃開掰斷(或用剪刀直接剪斷)。

將有紅細(xì)胞的開口端倒放入裝有 1mL 蒸餾水的離心管中,再以 1500 轉(zhuǎn)/分離心

5 分鐘,此時毛細(xì)管中的紅細(xì)胞沉淀于離心管底部,用鑷子從離心管中取出毛

細(xì)管丟棄后,將離心管放在混勻器上旋渦混勻制成溶血液。

4.png

離心管蓋上蓋,用針在蓋上扎一小孔,旋渦混勻器混勻,95℃水?。ɑ蛴缅侀_

蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻,然后 35004000 轉(zhuǎn)/,離心 10 分鐘,3000 轉(zhuǎn)

/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***532nm 處,1cm 光徑,蒸

餾水調(diào)零,測各管吸光度值。

a* 表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無水乙醇的量、試劑一的量,四者均相等。例如

樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、試劑一也取 0.1mL,若樣品取 0.2mL 則標(biāo)

準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正比曲線,因而結(jié)

果不受影響。

** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 12 只,若樣本不存在溶

血、脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。

*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以免沉淀

進(jìn)入比色皿,影響吸光度。

規(guī)范操作方法標(biāo)準(zhǔn)管吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL 時,則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)

管吸光度減去空白管的吸光度為 0.0650.070(酶標(biāo)儀測定 200μl 讀數(shù)時為 0.045

左右)。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL時,則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度為0.130

0.140(酶標(biāo)儀測定 200μl 讀數(shù)時為 0.1 左右)。

注:若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度太低,可以將水浴時間 40 分鐘延長至 80 分鐘,但您

的同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80 分鐘,以免造成批間差異。

②、方法二:(微量法)(用此方法所測各管吸光度值比規(guī)范操作方法所得值要

高,但不影響最終結(jié)果。)

先將已經(jīng)按規(guī)范操作方法配好的 MDA3 號試劑用 50%的冰醋酸按 21 稀釋,

例如將配好的 MDA3 號試劑 100mL,加 50%的冰醋酸 50mL,混勻。也可以用多少

配多少進(jìn)行以下檢測。

(注:50%冰醋酸的配制是 50mL 蒸餾水加 50mL 冰醋酸混合而成的。)

5.png

離心管蓋上蓋,用針在蓋上扎一小孔,旋渦混勻器混勻,95℃水浴(或用鍋開

蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻,然后 35004000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,(3000 轉(zhuǎn)

/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***,532nm 處,1cm 光徑,蒸

餾水調(diào)零,測各管吸光度值。

a* 表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無水乙醇的量、試劑一的量,四者均相等。例如

樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取 0.1mL,若樣品取 0.2mL 則標(biāo)

準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正比曲線,因而結(jié)

果不受影響。

** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 12 只,若樣本不存在溶血、

脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。

*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以免沉

淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。

注:若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度太低,可以將水浴時間 40 分鐘延長至 80 分鐘,但您的

同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80 分鐘,以免造成批間差異。

此方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL 時,分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)

管吸光度減去空白管的吸光度為 0.1030.112。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL 時,分

光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度為 0.2060.224

3、取某濃度的溶血液進(jìn)行血紅蛋白測定:

Hb 測定: 100 倍濃縮的 Hb 測試液 1mL (本所有貨供應(yīng)),加水至 100mL

成應(yīng)用測試液,取 1x 血球溶血液 20μl 加稀釋好的 Hb 應(yīng)用測試液

5mL, 充分混勻,靜置 5 分鐘,波長 540nm, 1cm 光徑,蒸餾水調(diào)零,

比色,記錄各管吸光度值。Hb 計(jì)算:將吸光度值乘以 367.7 即為

Hb 克數(shù)/升。如果血樣量特少時,則樣本量和試劑量均可減少一半

或按比例減少。

4、紅細(xì)胞中 MDA 的計(jì)算:

6.png

在旋渦混勻器上混勻 1 分鐘使細(xì)胞充分溶解。

③、抽提:在上述溶血液中加全血體積 2 倍的無水乙醇(0.3mL),(也可用 95%乙醇

代替)在旋渦混勻器上充分混勻 30 秒鐘。

④、沉淀蛋白:再加全血體積 2 倍的三氯-甲烷(0.3mL)置旋渦混勻器上混勻 1 分鐘,

然后 30003500 轉(zhuǎn)/分,離心 510 分鐘。此時液體分為三層,上層為 MDA

抽提液,中層為血紅蛋白沉淀物,下層為三氯-甲烷。取上清并記錄體積,約

0.9mL。

丙二醛(MDA)測試盒(TBA 法)

 

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