丙二醛(MDA)測試盒(TBA 法) 生化試劑
- 型 號:
- 參考價:0~0
丙二醛(MDA)測試盒(TBA 法),是在國內(nèi)外眾多測試方法的基礎(chǔ)上改進(jìn)的一種微量、快速、簡便、準(zhǔn)確、對操作人員健康無損害的測試方法。通過測試可反映出血清(漿)、乳汁等細(xì)胞外液、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞以及各種動植物的細(xì)胞水平及亞細(xì)胞水平的脂質(zhì)過氧化物的量。
丙二醛(MDA)測試盒(TBA 法)
(貨號:A003-1 TBA 法)
本試劑盒是在國內(nèi)外眾多測試方法的基礎(chǔ)上改進(jìn)的一種微量、快速、簡便、準(zhǔn)
確、對操作人員健康無損害的測試方法。通過測試可反映出血清(漿)、乳汁等細(xì)胞
外液、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞以及各種動植物的細(xì)胞水平及亞細(xì)胞水平的脂質(zhì)
過氧化物的量。
一、測定意義:
機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基,后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂
肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA),引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用,并因此形成脂質(zhì)過
氧化物。如:醛基(丙二醛 MDA)、酮基、羥基、羰基、氫過氧基或內(nèi)過氧基,以
及新的氧自由基等。脂質(zhì)過氧化作用不僅把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑,即非自由基
性的脂類分解產(chǎn)物,而且通過鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng),放大活性氧的作用。因此,初
始的一個活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成,這些分解產(chǎn)物中,一些是無害的,
另一些則能引起細(xì)胞代謝及功能障礙,甚至死亡。氧自由基不但通過生物膜中多不
飽和脂肪酸(PUFA)的過氧化引起細(xì)胞損傷,而且還能通過脂氫過氧化物的分解產(chǎn)
物引起細(xì)胞損傷。因而測試 MDA 的量常??煞从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度,間接
地反映出細(xì)胞損傷的程度。
MDA 的測定常常與 SOD 的測定相互配合,SOD 活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清
除氧自由基的能力,而 MDA 的高低又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程
度,通過 SOD 與 MDA 的結(jié)果分析有助于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥理及工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展。
二、測試原理:
過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛 (MDA)可與硫代巴-比妥酸 (TBA) * 縮合,
形成紅色產(chǎn)物,在 532nm 處有吸收峰。因底物為硫代巴-比妥酸(Thibabituric Acid
TBA)所以此法稱 TBA 法。
三、測試所需儀器設(shè)備:
可見光分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀,可調(diào)到 95℃左右的恒溫水浴箱或沸水鍋,離心機(jī),
10mL 離心管。
四、試劑盒組成與配制(50 管/48 樣 A003-1-1):
試劑一:液體 10mL×1 瓶,室溫保存。(天冷時會凝固,每次測試前可 37℃加熱
以加速溶解,直至透明方可應(yīng)用)。
試劑二:液體 6mL×1 瓶,用時每瓶加 170mL 蒸餾水混勻,4℃冷藏。(注意不
要碰到皮膚上)。
試劑三:粉劑×1 支,用時將粉劑加蒸餾水 30mL,加熱到 90℃~100℃充分溶解
后用蒸餾水補(bǔ)足至 30mL,再加冰醋酸 30mL,混勻,配好的試劑避光
冷藏。
標(biāo)準(zhǔn)品:10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶,4℃冷藏。
[注]:冰醋酸(分析純,乙酸濃度≥99.5%);測試盒冷藏至少可保存一年。
五、試劑盒組成與配制(100 管/96 樣 A003-1-2):
試劑一:液體 20mL×1 瓶,室溫保存。(天冷時會凝固,每次測試前可 37℃加熱
以加速溶解,直至透明方可應(yīng)用)。
試劑二:液體 12mL×1 瓶,用時每瓶加 340mL 蒸餾水混勻,4℃冷藏(注意不
要碰到皮膚上)。
試劑三:粉劑×1 支,用時將粉劑加蒸餾水 60mL,加熱到 90℃~100℃充分溶解
后用蒸餾水補(bǔ)足至 60mL,再加冰醋酸 60mL,混勻,配好的試劑避光
冷藏。
標(biāo)準(zhǔn)品:10nmol/mL 四乙氧基丙烷 5mL×1 瓶,4℃冷藏。
[注]:冰醋酸(分析純,乙酸濃度≥99.5%);測試盒冷藏至少可保存一年。
六、操作步驟:
1、操作表:
離心管蓋上蓋,用針在蓋上扎一小孔,旋渦混勻器混勻,95℃水浴(或用鍋開
蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻,然后 3500~4000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,(3000
轉(zhuǎn)/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***,532nm 處,1cm 光徑,
蒸餾水調(diào)零,測各管吸光度值。
[注]:a*:表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無水乙醇的量、試劑一的量,四者均相等。
(a*一般取 0.1-0.2mL)
例如樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、試劑一也取 0.1mL,若樣品取
0.2mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正
比曲線,故結(jié)果不受影響。
** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 1~2只,若樣本不存在
溶血、脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。
*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以
免沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。
2、參考取樣量:血清(漿)取 0.1~0.2mL。低密度脂蛋白懸液取 0.1~0.2mL 。食
油取 0.03mL。肝組織、心肌、肌肉組織、螺旋藻等,取 5%或 10%
勻漿 0.1~0.2mL 較好。
3、標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL 時,則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸
光度減去空白管的吸光度為 0.065~0.070(酶標(biāo)儀測定取 200μl 讀數(shù)時為 0.04
左右)。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL 時,則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度為
0.130~0.140(酶標(biāo)儀測定取 200μl 讀數(shù)時為 0.08 左右)。
4、規(guī)范操作方法及簡便操作方法中,若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度太低,可以將水浴時間
40 分鐘延長至 80 分鐘,但您的同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80 分鐘,
以免造成批間差異。
以免沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。
[注 2]:以上規(guī)范操作法及簡便操作法適用于人及各種動植物的樣本(包括血清、動
植物組織及體液、細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液等)。
[注 3]:規(guī)范操作方法及簡便操作方法中,若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度太低,可以將水浴
時間 40 分鐘延長至 80 分鐘,但您的同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至
80 分鐘,以免造成批間差異。
(一)、樣本前處理見實(shí)驗(yàn)方法學(xué)中的組織勻漿處理,可制成 10%或 5%的勻漿,
但要注意,因樣本量很少,所以做好的組織勻漿不要離心,例如培養(yǎng)
的細(xì)胞等破碎后可以不離心。取樣時注意要搖勻后立即取樣。
(二)、試劑組成與配制:
1、(100 管)微量操作法中的試劑三配制如下:
①、按規(guī)范操作方法來配制 MDA 3 號試劑:將 1 支 MDA 3 號粉劑倒入燒杯
內(nèi)加 90℃~100℃的熱蒸餾水 64mL*,充分溶解(溶解過程中可適當(dāng)加熱)。
冷卻后加冰醋酸 60mL 混勻。
②、再將上述配好的 MDA 3 號試劑用 50%冰醋酸**按 2:1 進(jìn)行稀釋,用多少配
多少。例如您需要用微量法測 MDA 需要試劑三為 15mL,則可以取上述按規(guī)
范操作法配好的試劑三 10mL 加 50%冰醋酸 5mL,混勻即可。配好的試劑避
光 4℃冰箱冷藏(冰醋酸自備)。
[注]:* 因蒸餾水熱脹冷縮,加熱過程要蒸發(fā),本應(yīng)加 60mL,現(xiàn)多加 4mL,
冷卻后在 60mL。
** 50%冰醋酸的配制是 50mL 蒸餾水加 50mL 冰醋酸混合而成的。
*** 冰醋酸又名乙酸,分析純,乙酸濃度≥99.5%。
2、(50 管)微量操作法中的試劑三配制如下:
①、按規(guī)范操作方法來配制 MDA 3 號試劑:將 1 支 MDA 3 號粉劑倒入燒杯內(nèi)
加 90℃~100℃的熱蒸餾水 32mL*,充分溶解(溶解過程中可適當(dāng)加熱)。
冷卻后加冰醋酸 30mL 混勻。
②、再將上述配好 MDA 3 號試劑用 50%冰醋酸按 2:1 進(jìn)行稀釋,用多少配多少。
例如您需要用微量法測 MDA 需要試劑三為 15mL,則可以取上述按規(guī)范操作
法配好的試劑三 10mL 加 50%冰醋酸 5mL,混勻即可。配好的試劑避光 4℃
冰箱冷藏(冰醋酸自備***)。
[注]:* 因蒸餾水熱脹冷縮,加熱過程要蒸發(fā),本應(yīng)加 30mL,現(xiàn)多加 2mL,
冷卻后在 30mL。
** 50%冰醋酸的配制是 50mL 蒸餾水加 50mL 冰醋酸混合而成的。
*** 冰醋酸又名乙酸,分析純,乙酸濃度≥99.5%。
(三)、操作步驟:
離心管蓋上蓋,用針在蓋上扎一小孔,旋渦混勻器混勻,95℃水?。ɑ蛴缅侀_
蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻,然后 3500~4000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,(3000
轉(zhuǎn)/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***,532nm 處,1cm 光徑,
蒸餾水調(diào)零,測各管吸光度值。
a*表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無水乙醇的量、試劑一的量,四者均相等。例如
樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取 0.1mL,若樣品取 0.2mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、
無水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正比曲線,因而結(jié)果不受影響。
** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 1~2 只,若樣本不存
在溶血、脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。
*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以免
沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。
注 1 :用此方法所測各管吸光度值比規(guī)范操作方法要高,但不影響最終結(jié)果。
注 2 :5%組織勻漿 a*取 0.1~0.2mL 進(jìn)行檢測較好。
注③:若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度太低,可以將水浴時間 40 分鐘延長至 80 分鐘,
但您的同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80 分鐘,以免造成批間
差異。
注④:此方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL 時,則標(biāo)準(zhǔn)管吸光
度減去空白管吸光度為 0.103~0.112。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL 時,則
標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管吸光度為 0.206~0.224。
(四)、計(jì)算公式及舉例:
樣本、試劑一為相同量。
** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 1~2 只,若樣本不存在溶血、
脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。
*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以免
沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。
2、標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL 時,則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管
吸光度減去空白管的吸光度為 0.065~0.070(酶標(biāo)儀測
定取 200μl 讀數(shù)時為 0.045 左右)。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為
0.2mL 時,則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度為
0.130~0.140(酶標(biāo)儀測定取 200μl 讀數(shù)時為 0.1 左右)。
旋渦混勻器混勻,離心管口用保鮮薄膜扎緊,用針頭刺一小孔,95℃水?。ɑ?/span>
用鍋開蓋煮沸)80 分鐘,取出后流水冷卻,然后 3500~4000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,
(3000 轉(zhuǎn)/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***,532nm 處,1cm
光徑,蒸餾水調(diào)零,測各管吸光度值。
a*為樣本取樣量,標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、樣本量均相等,生理鹽水的量為樣本的兩
倍,試劑一的量為樣本的四倍。例如高脂血清取 0.1mL,則標(biāo)準(zhǔn)品,無水乙
醇取 0.1mL,生理鹽水取 0.2mL,試劑一取 0.4mL。
** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 1~2 只,若樣本不存在溶
血、脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。
*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以免
沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。
3、標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:此方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL
時,則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸
光度為 0.113~0.122。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL 時,
則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度
為 0.216~0.234。
離心管蓋上蓋,用針在蓋上扎一小孔,旋渦混勻器混勻,95℃水浴(或用鍋開
蓋煮沸)80 分鐘,取出后流水冷卻,然后 3500~4000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,(3000
轉(zhuǎn)/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***,532nm 處,1cm 光徑,
蒸餾水調(diào)零,測各管吸光度值。
a* 為樣本取樣量,標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、樣本量均相等,試劑一的量為樣本的
三倍。例如高脂血清取 0.1mL,則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇取 0.1mL,試劑一取
0.3mL。
** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 1~2 只,若樣本不存
在溶血、脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。
*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,
以免沉淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。
2、標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:此方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL
時,則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸
光度為 0.114~0.123。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL 時,
則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度
為 0.216~0.235。
十、紅細(xì)胞中的 MDA 檢測方法
(一)、微量紅細(xì)胞中的 MDA 檢測方法(樣本量少時用)
1、樣本前處理:(可用以下二種方法中的一種)
(1)、載玻片取全血,進(jìn)行 MDA 測定:
如果您所需測的血樣很少又很珍貴,例如新生兒指血,或小老鼠的尾血,可采
用載玻片上滴加 1~2 滴肝素涂勻,60oC 以下烤干,或自然吹干。將以上采取的少
量血樣滴在有肝素的載玻片上,用微量加樣器取您所需的血量,再制備成 1︰99 的
溶血液。(即全血︰蒸餾水=1︰99)
(2)、玻璃微量采血管采集紅細(xì)胞及溶血液的制備:
①、用 20μl 的玻璃微量采血管取載玻片上的肝素抗凝全血 20μl 左右。將玻璃毛細(xì)采
血管置水平位,迅速取下吸球,將空隙長的一端放在酒精燈火焰的三分之一處
燒至透紅,管端變成圓球狀閉結(jié)為止。用尺測量并記錄血柱長度 a 厘米。用紙
將采血管卷好,然后將采血管封閉端朝下裝入離心管中,1500 轉(zhuǎn)/分離心 5~10
分鐘,取出后用小砂輪在血清與紅細(xì)胞分界處劃開掰斷(或用剪刀直接剪斷)。
將有紅細(xì)胞的開口端倒放入裝有 1mL 蒸餾水的離心管中,再以 1500 轉(zhuǎn)/分離心
5 分鐘,此時毛細(xì)管中的紅細(xì)胞沉淀于離心管底部,用鑷子從離心管中取出毛
細(xì)管丟棄后,將離心管放在混勻器上旋渦混勻制成溶血液。
離心管蓋上蓋,用針在蓋上扎一小孔,旋渦混勻器混勻,95℃水?。ɑ蛴缅侀_
蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻,然后 3500~4000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,(3000 轉(zhuǎn)
/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***,532nm 處,1cm 光徑,蒸
餾水調(diào)零,測各管吸光度值。
a* 表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無水乙醇的量、試劑一的量,四者均相等。例如
樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇、試劑一也取 0.1mL,若樣品取 0.2mL 則標(biāo)
準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正比曲線,因而結(jié)
果不受影響。
** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 1~2 只,若樣本不存在溶
血、脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。
*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以免沉淀
進(jìn)入比色皿,影響吸光度。
規(guī)范操作方法標(biāo)準(zhǔn)管吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL 時,則分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)
管吸光度減去空白管的吸光度為 0.065~0.070(酶標(biāo)儀測定 200μl 讀數(shù)時為 0.045
左右)。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL時,則標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度為0.130~
0.140(酶標(biāo)儀測定 200μl 讀數(shù)時為 0.1 左右)。
注:若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度太低,可以將水浴時間 40 分鐘延長至 80 分鐘,但您
的同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80 分鐘,以免造成批間差異。
②、方法二:(微量法)(用此方法所測各管吸光度值比規(guī)范操作方法所得值要
高,但不影響最終結(jié)果。)
先將已經(jīng)按規(guī)范操作方法配好的 MDA3 號試劑用 50%的冰醋酸按 2︰1 稀釋,
例如將配好的 MDA3 號試劑 100mL,加 50%的冰醋酸 50mL,混勻。也可以用多少
配多少進(jìn)行以下檢測。
(注:50%冰醋酸的配制是 50mL 蒸餾水加 50mL 冰醋酸混合而成的。)
離心管蓋上蓋,用針在蓋上扎一小孔,旋渦混勻器混勻,95℃水浴(或用鍋開
蓋煮沸)40 分鐘,取出后流水冷卻,然后 3500~4000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,(3000 轉(zhuǎn)
/分以下離心時間需延長,目的使沉淀)。取上清***,532nm 處,1cm 光徑,蒸
餾水調(diào)零,測各管吸光度值。
a* 表示所取的樣品量、標(biāo)準(zhǔn)品量、無水乙醇的量、試劑一的量,四者均相等。例如
樣品取 0.1mL 則標(biāo)準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取 0.1mL,若樣品取 0.2mL 則標(biāo)
準(zhǔn)品、無水乙醇及試劑一也取 0.2mL。因吸光度與加樣量呈正比曲線,因而結(jié)
果不受影響。
** 一般情況下,標(biāo)準(zhǔn)管、空白管及對照管每批只需做 1~2 只,若樣本不存在溶血、
脂血現(xiàn)象,則對照管可以不測,用空白管來代替對照管。
*** 吸取上清比色時用移液器吸取上清加入比色皿中,盡量避免傾倒,以免沉
淀進(jìn)入比色皿,影響吸光度。
注:若發(fā)現(xiàn)檢測樣本吸光度太低,可以將水浴時間 40 分鐘延長至 80 分鐘,但您的
同一課題中 MDA 的檢測都必須延長至 80 分鐘,以免造成批間差異。
此方法標(biāo)準(zhǔn)管參考吸光度:當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.1mL 時,分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)
管吸光度減去空白管的吸光度為 0.103~0.112。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品取樣量為 0.2mL 時,分
光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)管吸光度減去空白管的吸光度為 0.206~0.224。
3、取某濃度的溶血液進(jìn)行血紅蛋白測定:
Hb 測定:取 100 倍濃縮的 Hb 測試液 1mL (本所有貨供應(yīng)),加水至 100mL 配
成應(yīng)用測試液,取 1:x 血球溶血液 20μl 加稀釋好的 Hb 應(yīng)用測試液
5mL, 充分混勻,靜置 5 分鐘,波長 540nm, 1cm 光徑,蒸餾水調(diào)零,
比色,記錄各管吸光度值。Hb 計(jì)算:將吸光度值乘以 367.7 即為
Hb 克數(shù)/升。如果血樣量特少時,則樣本量和試劑量均可減少一半
或按比例減少。
4、紅細(xì)胞中 MDA 的計(jì)算:
在旋渦混勻器上混勻 1 分鐘使細(xì)胞充分溶解。
③、抽提:在上述溶血液中加全血體積 2 倍的無水乙醇(0.3mL),(也可用 95%乙醇
代替)在旋渦混勻器上充分混勻 30 秒鐘。
④、沉淀蛋白:再加全血體積 2 倍的三氯-甲烷(0.3mL)置旋渦混勻器上混勻 1 分鐘,
然后 3000~3500 轉(zhuǎn)/分,離心 5~10 分鐘。此時液體分為三層,上層為 MDA
抽提液,中層為血紅蛋白沉淀物,下層為三氯-甲烷。取上清并記錄體積,約
0.9mL。
丙二醛(MDA)測試盒(TBA 法)