檸檬酸（Citric Acid,CA）試劑盒

（50T/48 樣）

一、測(cè)定意義

檸檬酸（CA）是生物體內(nèi)常見(jiàn)的有機(jī)酸，是重要的

食品風(fēng)味物質(zhì)。此外，CA 是三羧酸循環(huán)第一步反應(yīng)的產(chǎn)

物。

二、測(cè)定原理

酸性條件下，檸檬酸還原 Cr 6+生成 Cr 3+ ,Cr 3+在 545nm

處有特征吸收峰；通過(guò)測(cè)定 545nm 吸光值的增加，即可

計(jì)算出樣品中檸檬酸含量。

三、自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器。

水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL 玻璃

比色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

四、試劑組成和配制

試劑一：液體×1 瓶，4°C 保存；

試劑二：液體×1 瓶，4°C 保存；

試劑三：液體×1 支，-20°C 保存；

試劑四：粉劑×1 瓶，室溫保存；臨用前加入 5mL 試劑一，

充分溶解配置；

試劑五：液體×1 瓶，4°C 避光保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支，250μmol/L 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液，4°C 保存。

五、樣品中檸檬酸提取

1、液體樣品中檸檬酸提?。喝?/span> 0.1mL 液體加試劑一 0.9mL，

充分混勻，11000g，4°C 離心 10min，取上清液待測(cè)；

2、組織中檸檬酸提取：按照組織質(zhì)量（g）:提取液體積

（mL）為 1:5 至 10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，11000g；4°C 離心

10min，取上清液置冰上待測(cè)；

3、線粒體中檸檬酸提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：提取液體

積（mL）為 1：5 至 10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿；

600g，

4°C 離心 5min；

取上清至另一 EP 管中，11000g，4°C 離心 10min，棄

上清；向沉淀中加 200μL 試劑二，與 2μL 試劑三，充

分懸浮溶解，11000g；4°C 離心 10min，取上清液待測(cè)。

4、細(xì)菌、真菌中：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4 個(gè)）：試劑一體積

（mL）為 500-1000:1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入試

劑一 1mL），冰水浴超聲破碎細(xì)胞（功率 300W，超聲

3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3 分鐘），11000g；4°C 離心

10min，取上清液待測(cè)。

八、注意事項(xiàng)

1、樣品處理等過(guò)程均需在冰上進(jìn)行；

2、試劑四需現(xiàn)配現(xiàn)用；

3. 試劑五中含有致癌物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，請(qǐng)佩戴手套，

避免試劑五濺到皮膚上；

4. 檸檬酸提取液不能用于蛋白含量測(cè)定，如需測(cè)定蛋白

含量，需另取組織，使用本研究所蛋白質(zhì)含量檢測(cè)試

劑盒（考馬或 BCA 法）。

 檸檬酸（Citric Acid,CA）試劑盒